Revvity, ALSU-PRB-A500, AlphaLISA SureFire Ultra, kit de detección de fosforilación humana y de ratón (Ser807/811), 500 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína del retinoblastoma (Rb) es un supresor tumoral crucial y regulador del ciclo celular tanto en humanos como en ratones. Rb desempeña un papel fundamental en diversos procesos celulares, como el control del ciclo celular, la replicación del ADN, la apoptosis y la diferenciación. Su actividad se regula principalmente mediante la fosforilación, siendo Ser807/811 sitios de especial importancia. La fosforilación de Rb en ​​Ser807/811 se asocia con su inactivación, lo que conduce a la progresión del ciclo celular y la proliferación celular. La señalización de Rb se desregula con frecuencia en diversas enfermedades, especialmente en el cáncer, donde la fosforilación aberrante y la inactivación de Rb contribuyen a la proliferación celular descontrolada, la progresión tumoral y la resistencia a la terapia.
El kit de detección de fosforilación de Rb (Ser807/811) humana y de ratón AlphaLISA SureFire Ultra es un inmunoensayo tipo sándwich de alta sensibilidad diseñado para la detección cuantitativa de Rb fosforilado (Ser807/811) en lisados ​​celulares de muestras humanas y de ratón, utilizando tecnología Alpha.
Formatos

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

En el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra, las microesferas donantes se recubren con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos, que está biotinilado. Las microesferas aceptoras se recubren con un agente patentado CaptSure™ que inmoviliza el otro anticuerpo, marcado con una etiqueta CaptSure™. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donantes y aceptoras, generando una señal. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.
Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire se pueden utilizar para

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra mide un objetivo proteico cuando se fosforila en un residuo específico.

El ensayo utiliza dos anticuerpos que reconocen el epítopo fosforilado y un epítopo distal de la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de proteína fosforilada, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadora y aceptora, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de emisión de luz es directamente proporcional a la cantidad de fosfoproteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana fosforilada con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-Rb
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo