Revvity, ALSU-TARIDB-A-HV, AlphaLISA Kit de detección de ARID1B total en humanos y ratones, 100 puntos de ensayo

Descripción general
El Dominio de Interacción Rico en AT 1B (ARID1B) es una proteína de remodelación de la cromatina y una subunidad central del complejo SWI/SNF que regula la expresión génica mediante el reposicionamiento de nucleosomas dependiente de ATP. ARID1B es particularmente importante para el desarrollo neuronal, ya que regula la diferenciación neuronal, la función sináptica y la morfogénesis cerebral. La haploinsuficiencia de ARID1B causa el síndrome de Coffin-Siris, caracterizado por discapacidad intelectual y retraso del desarrollo. Las mutaciones de ARID1B también se encuentran en diversos tipos de cáncer, como el neuroblastoma y el cáncer de mama, donde la pérdida de función contribuye a la progresión tumoral. La función supresora tumoral de ARID1B lo convierte en una diana importante para el desarrollo de terapias epigenéticas.
AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total ARID1B es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de ARID1B total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra
El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.
El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión de ARID1B en varias líneas celulares
Se evaluó la expresión de ARID1B en varias líneas celulares utilizando el kit de ensayo AlphaLISA SureFire Ultra.
Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado (aproximadamente 5000 células adherentes y 8000 células en suspensión) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donante a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
La proteína ARID1B se expresó en niveles altos en todas las líneas celulares analizadas. Se detectaron niveles similares de la proteína ARID1B en las líneas celulares HEK293T (ARID1A-KO) y HEK293T de tipo silvestre.
Sensibilidad del ensayo
Sensibilidad total del ensayo ARID1B: dilución del lisado celular
El lisado celular se preparó a partir de células HCT-116 cultivadas hasta la confluencia en matraces T175 y se lizaron en 16 ml de tampón de lisis durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación.
El lisado se diluyó en serie en tampón de lisis y los niveles de ARID1B se evaluaron con AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
Se indica el número aproximado de células por punto de datos. La línea punteada representa el fondo del ensayo. Este ensayo puede detectar la expresión de ARID1B en menos de 100 células por punto de datos.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 30 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-ARID1B
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo