Revvity, ALSU-TCDK6-A50K, kit de detección de CDK6 total humano AlphaLISA, 50 000 puntos de ensayo

Descripción general
La quinasa dependiente de ciclina 6 (CDK6) pertenece a la subfamilia de las CDK que coordinan la progresión del ciclo celular en células de mamíferos. Señales mitogénicas, como los factores de crecimiento, inducen la entrada de las células en la fase G1 del ciclo celular induciendo la síntesis de ciclina D. Esta última interactúa con CDK4 y CDK6 para formar complejos activos. Ambas quinasas activadas pueden entonces monofosforilar el supresor tumoral RB (proteína del retinoblastoma), que aún se une al factor de transcripción E2F, pero algunos genes, como la ciclina E, pueden transcribirse. La CDK6 se sobreexpresa en numerosos cánceres, como linfoma, leucemia, glioblastoma, cáncer de vejiga, páncreas y próstata.
El kit de detección de CDK6 total humano AlphaLISA SureFire es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de CDK6 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire se pueden utilizar para

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión de CDK6 en varias líneas celulares
Se sembraron 50.000 células adherentes por pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en medio completo y se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO₂. Las células se lisaron con 100 µL de tampón de lisis.
Las células en suspensión se sembraron a una concentración de 50.000 células/pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en HBSS + 0,1 % de BSA y se lisaron con 100 µL de tampón de lisis. Los niveles totales de CDK6 se evaluaron mediante el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (aproximadamente 5.000 células) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un analizador Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
CDK6 se expresa en una amplia gama de tipos de células humanas.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-CDK6
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 50.000 puntos de ensayo