Revvity, ALSU-TIRAK-A10K, AlphaLISA SureFire Ultra Kit de detección total de IRAK4 en humanos y ratones, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
La quinasa 4 asociada al receptor de interleucina-1 (IRAK4) es una serina/treonina quinasa que desempeña un papel fundamental en la señalización inmunitaria innata a través de los receptores tipo Toll (TLR) y los receptores de interleucina-1 (IL-1R). Tras la activación del receptor, IRAK4 se recluta al complejo middosoma, donde inicia cascadas de señalización posteriores que conducen a la activación de NF-κB, MAPK y factores reguladores del interferón (IRF). IRAK4 es esencial para la producción de citocinas proinflamatorias y es un regulador clave de la respuesta inmunitaria. La desregulación de la actividad de IRAK4 se ha relacionado con enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios y ciertos tipos de cáncer, lo que la convierte en una diana terapéutica prometedora.
El kit de detección total de IRAK4 en humanos y ratones AlphaLISA SureFire Ultra es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de IRAK4 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.

Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

En el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra, las microesferas donantes se recubren con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos, que está biotinilado. Las microesferas aceptoras se recubren con un agente patentado CaptSure™ que inmoviliza el otro anticuerpo, marcado con una etiqueta CaptSure. En presencia de la proteína diana, ambos anticuerpos acercan las microesferas donantes y aceptoras, generando una señal. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.
Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Versatilidad del ensayo IRAK4 total en diversas líneas celulares
Se sembraron 50.000 células adherentes por pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en medio completo y se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO₂. Las células se lisaron con 50 µL de tampón de lisis.
Las células en suspensión se sembraron a una concentración de 50.000 células/pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en HBSS + 0,1 % de BSA y se lisaron con 50 µL de tampón de lisis. Los niveles totales de IRAK4 se evaluaron mediante el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (aproximadamente 10.000 células) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un analizador Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
IRAK4 se expresa en una amplia gama de líneas celulares comunes.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-IRAK4
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área terapéutica - Inflamación autoinmunitaria
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo