Revvity, ALSU-TIRF5-A-HV, AlphaLISA SureFire Ultra Kit de detección total de IRF5 en humanos y ratones, 100 puntos de ensayo

Descripción general
El factor regulador del interferón 5, IRF5, es un regulador transcripcional de las respuestas inmunitarias dependientes del interferón tipo I (IFN-alfa e IFN-beta). Este factor de transcripción desempeña un papel clave en la respuesta inmunitaria innata contra virus de ADN y ARN. El IRF5 está presente en el citoplasma de las células no infectadas en forma inactiva. Diversos mediadores de las vías que siguen a la infección viral pueden sobreexpresar y fosforilar el IRF5. El IRF5 se asocia con diversos tipos de cáncer y enfermedades autoinmunitarias.
El kit de detección total de IRF5 en humanos y ratones AlphaLISA SureFire Ultra es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de IRF5 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire se pueden utilizar para

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Evaluación de la expresión total de IRF5 en células mononucleares de sangre periférica
Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron de donantes sanos utilizando Ficoll® Plaque Plus (Merck GE17-1440-02).
Las células se sembraron en una placa de 96 pocillos (400.000 células/pocillo) y se lisaron en 100 µL de tampón de lisis durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación (350 rpm). El lisado generado se diluyó en serie en tampón de lisis y se evaluó con AlphaLISA SureFire Ultra Total IRF5. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (a partir de aproximadamente 40.000 células) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA. El número de células/punto de datos se indica en el gráfico.

Expresión diferencial de IRF5 Total en varias líneas celulares
Los lisados ​​celulares humanos y murinos se diluyeron con tampón de lisis. El número aproximado de células por punto de datos se indica en el gráfico. Los niveles totales de IRF5 se evaluaron con el kit de ensayo AlphaLISA SureFira Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguidos de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
La expresión total de IRF5 varía según el tipo celular. Como era de esperar, se detectó un nivel muy alto de expresión en las líneas celulares humanas THP-1, KARPAS-299 y U937, y en las líneas celulares de ratón RAW 264.7 y L929.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 30 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-IRF5
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área terapéutica - Oncología de la inflamación
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo