Revvity, ALSU-TMSH3-A-HV, kit de detección de MSH3 total humano AlphaLISA, 100 puntos de ensayo

Descripción general
El homólogo 3 de MutS (MSH3) es una proteína reparadora de errores de apareamiento del ADN que forma el complejo MutSβ con MSH2 para reconocer y reparar bucles de inserción-deleción (IDL) y errores de apareamiento más grandes en el ADN. MSH3 es particularmente importante para reparar intermediarios de cadena deslizada que surgen durante la replicación del ADN en secuencias repetitivas, incluyendo microsatélites. El complejo MutSβ inicia la reparación reclutando MLH1-PMS2 (MutLα) y otros factores posteriores para escindir y resintetizar la cadena de ADN que contiene el error. La deficiencia de MSH3 provoca inestabilidad de microsatélites (MSI) y un aumento de las tasas de mutación, especialmente en secuencias repetitivas. Las mutaciones de MSH3 se asocian con ciertos síndromes de cáncer hereditario y contribuyen a la tumorogénesis a través de la inestabilidad genómica. En el tratamiento del cáncer, el estado de MSH3 influye en la respuesta a agentes que dañan el ADN y a la inmunoterapia, ya que los tumores MSI suelen presentar una inmunogenicidad mejorada.
AlphaLISA SureFire Ultra Human Total MSH3 es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de MSH3 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra
El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.
El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión endógena de MSH3 en varias líneas celulares
Las células adherentes se sembraron a una concentración de 40.000 células/pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en medio completo y se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO₂. Las células se lisaron con 100 µL de tampón de lisis. Las células en suspensión se lavaron con HBSS y se lisaron con tampón de lisis a una concentración de 4 x 10⁻¹ células/ml.
Los niveles de MSH3 se evaluaron con AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (4000 células adherentes o 40 000 células en suspensión) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguido de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donante a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
Se detectaron niveles endógenos de MSH3 en varios tipos de células.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 30 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-MSH3
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área terapéutica-Neurociencia Oncológica
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo