Revvity, ALSU-TNFKB2-A-HV, AlphaLISA Kit de detección de NFκB2 p100/p52 total en humanos y ratones, 100 puntos de ensayo

Descripción general
NF-κ-B2 p100 es una proteína precursora de la familia NF-κ-B, que desempeña un papel clave en la regulación de la respuesta inmunitaria, la inflamación y la supervivencia celular. p100 puede procesarse a p52, una forma transcripcionalmente activa que entra al núcleo para activar genes diana implicados en la respuesta inmunitaria y la apoptosis. La desregulación de NF-κ-B2 se asocia con enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, ciertos linfomas y mieloma múltiple, lo que la convierte en una diana potencial para estrategias terapéuticas.
El kit de detección total de NFκB p100/p52 en humanos y ratones AlphaLISA SureFire Ultra es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de NFκB p100/p52 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión diferencial del ensayo total de NFκB2 p100/p52 en varias líneas celulares
Se sembraron diversas células adherentes humanas y de ratón a razón de 40.000 células/pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en medio completo y se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO₂. Las células se lisaron al día siguiente con 100 µL de tampón de lisis.
Los niveles totales de NFκB2 p100/p52 se evaluaron mediante el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL (aproximadamente 4000 células) de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguidos de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
Se detectó la expresión total de NFκB2 p100/p52 en todas las líneas celulares adherentes humanas y murinas analizadas. Se detectó un nivel muy alto de expresión en las células SW 1573 y NIH/3T3, con niveles más bajos en las células HEK293T, A431, HeLa, RAW 264.7, SH-SY5Y y HEK293, lo que demuestra la versatilidad del ensayo de NFκB2 p100/p52.
Aplicación: Cuantificación de proteínas
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Especie huésped: ratón humano
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-NFkB2
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área terapéutica-Inflamación
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo