Revvity, ALSU-TP16INK4-A-HV, kit de detección de p16 INK4A total humano AlphaLISA, 100 puntos de ensayo

Descripción general
El inhibidor de la cinasa dependiente de ciclina 2A (p16 INK4A) es una proteína supresora de tumores que inhibe las cinasas dependientes de ciclina 4 y 6 (CDK4/6), regulando así el ciclo celular al prevenir la fosforilación de la proteína del retinoblastoma (Rb). Esta acción detiene la progresión del ciclo celular de la fase G1 a la fase S, inhibiendo así la proliferación celular. Las mutaciones o deleciones en el gen p16 INK4A se asocian con varios tipos de cáncer, como el melanoma, el cáncer de páncreas y los cánceres de cabeza y cuello. También se han observado niveles elevados de p16 INK4A en enfermedades neurodegenerativas como el Alzheimer, donde puede contribuir a la pérdida de la función neuronal y al deterioro cognitivo.
El kit de detección AlphaLISA SureFire Ultra Human Total p16 INK4A es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de p16 INK4A total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión diferencial de p16 INK4A total en varias líneas celulares humanas
Los lisados ​​celulares humanos se diluyeron con tampón de lisis. El número aproximado de células por punto de datos se indica en el gráfico. Los niveles totales de p16 INK4A se evaluaron con el kit de ensayo AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguidos de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
La expresión total de p16 INK4A depende del tipo celular. Como era de esperar, se detectó un nivel muy alto de expresión en células HEK293 y HeLa, con una expresión menor en células Hep G2, SH-SY5Y y BeWo.
Aplicación: Cuantificación de proteínas
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Especie huésped: humana
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-p16 INK4A
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo