Revvity, ALSU-TP21CIP-A-HV, kit de detección AlphaLISA Human Total p21 CiP1, 100 puntos de ensayo

Descripción general
El inhibidor de la quinasa dependiente de ciclina 1 (p21 CiP1), también conocido como CDKN1A, es un potente inhibidor de las quinasas dependientes de ciclina y participa en la regulación del ciclo celular. p21 inhibe la actividad de los complejos CDK2 y CDK4, lo que provoca la detención del ciclo celular en la fase G1, y está regulado por la proteína supresora de tumores p53 en respuesta al daño del ADN. p21 Cip1 tiene una doble función en el cáncer. Puede actuar como supresor de tumores inhibiendo la proliferación celular y promoviendo la reparación del ADN. Sin embargo, en algunos contextos, también puede promover la tumorigénesis inhibiendo la apoptosis y permitiendo la supervivencia de las células cancerosas. El aumento de la expresión de p21 Cip1 también se asocia con la senescencia celular, que contribuye al envejecimiento y a las enfermedades relacionadas con la edad.
El kit de detección AlphaLISA SureFire Ultra Human Total p21 CiP1 es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de p21 CiP1 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión diferencial de p21 CiP1 total en líneas celulares humanas y de ratón
Se sembraron líneas celulares humanas y de ratón a una concentración de 40.000 células/pocillo en una placa de cultivo de 96 pocillos en medio completo y se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO₂. Las células se lisaron al día siguiente con 100 µL de tampón de lisis.
Los niveles totales de p21 CiP1 se evaluaron mediante el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL (aproximadamente 4000 células) de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguidos de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
Se detectó la expresión total de p21 CiP1 en todas las líneas celulares adherentes humanas y murinas analizadas. Se detectó un nivel muy alto de expresión en células HeLa, HEK293 y SW 1573, con una expresión menor en células A431, SH-SY5Y, HEK293T, RAW 264.7 y NIH/3T3, lo que demuestra la versatilidad del ensayo de p21 CiP1 total.
Aplicación: Cuantificación de proteínas
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Especie huésped: humana
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-p21 CiP1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo