Revvity, ALSU-TRIPK1-B10K, kit de detección de RIPK1 total en ratón AlphaLISA, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
La serina/treonina-proteína quinasa 1 que interactúa con el receptor (RIPK1) es un regulador crucial de la muerte celular y la inflamación. RIPK1 puede mediar la supervivencia celular, la apoptosis o la necroptosis, dependiendo del contexto celular y las modificaciones postraduccionales. En su forma activa, RIPK1 promueve la necroptosis al interactuar con RIPK3 y MLKL. La desregulación de la actividad de RIPK1 está implicada en enfermedades inflamatorias y neurodegenerativas, así como en el cáncer.
El kit de detección total de RIPK1 AlphaLISA SureFire Ultra Mouse es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de RIPK1 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.

El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Validación del ensayo total de RIPK1 de ratón en varias líneas celulares
Los lisados ​​de células humanas y de ratón se diluyeron con tampón de lisis.
Los niveles totales de RIPK1 se evaluaron con AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (aproximadamente 4000 células para líneas celulares humanas y 8000 células para líneas celulares de ratón) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguida de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
Como se esperaba, el ensayo AlphaLISA SureFire Ultra Mouse RIPK1 Total reconoce los niveles totales de RIPK1 solo en líneas celulares de ratón; no se detectó ninguna señal en líneas celulares humanas.
Aplicación: Cuantificación de proteínas
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Especie huésped: ratón
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-RIPK1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón
Tecnología-Alfa
Área terapéutica-Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo