Revvity, ALSU-TSTNG-B-HV, kit de detección total de STING en ratón AlphaLISA, 100 puntos de ensayo

Descripción general
El estimulador de genes de interferón (STING) es una proteína adaptadora que media la respuesta inmunitaria innata al ADN citosólico. Tras la unión de los dinucleótidos cíclicos (CDN) producidos por cGAS en respuesta a la detección del ADN, STING experimenta cambios conformacionales y se transloca del RE al Golgi, iniciando la inducción de interferones tipo I y citocinas inflamatorias, dependiente de TBK1 e IRF3. STING desempeña un papel crucial en la defensa antiviral, la inmunovigilancia del cáncer y la patogénesis autoinmune. Se están investigando los agonistas de STING para la inmunoterapia contra el cáncer, con el objetivo de reforzar la inmunidad antitumoral, mientras que se están explorando inhibidores para enfermedades autoinflamatorias y autoinmunes causadas por una señalización excesiva de IFN tipo I.
AlphaLISA SureFire Ultra Mouse Total STING es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de STING total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra
El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.
El ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadoras y aceptoras, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión de STING en varias líneas celulares de ratón
Las líneas celulares adherentes se sembraron en una placa de 96 pocillos (60.000 células/pocillo) y se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO₂. Las células se lisaron con 50 µL de tampón de lisis B durante 20 minutos a temperatura ambiente con agitación (350 rpm).
La línea celular en suspensión (células EL-4) se sembró en una placa de 96 pocillos (200 000 células/pocillo) en HBSS + 0,1 % de BSA y luego se lisó con 100 µL de tampón de lisis B durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación (350 rpm).
Los niveles totales de STING se evaluaron con AlphaLISA SureFire Ultra. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado celular (aproximadamente 12 000 células adherentes o 20 000 células en suspensión) a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguida de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donante a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 30 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-STING
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón
Tecnología-Alfa
Área terapéutica-Inflamación Oncología Virología
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo