Revvity, ASBF-PNFKB-A10K, kit de detección AlphaLISA de fosfo-NF-κB p65 (Ser536) humano y murino sin biotina, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
NF-κB p65 (RelA) es una subunidad clave del complejo factorial de transcripción NF-κB, que regula genes implicados en la inflamación, la respuesta inmunitaria, la apoptosis y la proliferación celular. En su estado inactivo, p65 es secuestrado en el citoplasma por las proteínas IκB. Tras la activación por estímulos proinflamatorios como TNFα, IL-1 o señales asociadas a patógenos, IκB se fosforila y degrada, lo que permite que NF-κB p65 se transloque al núcleo e impulse la transcripción de genes diana. La desregulación de la actividad de NF-κB p65 contribuye a la inflamación crónica, las enfermedades autoinmunitarias y el cáncer, en particular al impulsar la inflamación que promueve tumores y la resistencia a la apoptosis.
El kit de detección de fosfo-NF-κB p65 (Ser536) humano y de ratón sin biotina AlphaLISA SureFire es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de fosfo-NF-κB p65 (Ser536) en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Biotin-Free son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits AlphaLISA SureFire Biotin-Free se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free
El ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free mide un objetivo proteico cuando se fosforila en un residuo específico.
El ensayo utiliza dos anticuerpos que reconocen el epítopo fosforilado y un epítopo distal en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con un agente patentado CaptSure 3 para capturar uno de los anticuerpos de detección, marcado con una etiqueta CaptSure 3. En presencia de proteína fosforilada, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadora y aceptora, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de emisión de luz es directamente proporcional a la cantidad de fosfoproteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas sin biotina Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa Optiplate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa sin biotina Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana fosforilada con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free se puede realizar en una sola placa para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la robusta calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire sin biotina
Modalidad de detección alfa
Kit de grupo de productos
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-NF-κB p65
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área terapéutica - Oncología de la inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo