Revvity, ASBF-TIRF5-A500, kit de detección de IRF5 total humano y murino sin biotina AlphaLISA, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El factor regulador del interferón 5 (IRF5) es un factor de transcripción que participa en la inmunidad innata y las respuestas inflamatorias, regulando la expresión de interferones tipo I (IFN-alfa e IFN-beta) y citocinas proinflamatorias. Activado por receptores de reconocimiento de patrones como los receptores tipo Toll (TLR), MDA5 o STING en respuesta a una infección viral, el IRF5 desempeña un papel crucial en la defensa antiviral. En su forma inactiva, el IRF5 reside en el citoplasma de las células no infectadas. Tras su activación, sufre fosforilación, dimerización y localización nuclear para impulsar la expresión génica. La desregulación del IRF5 se relaciona con enfermedades autoinmunes como el lupus y la artritis reumatoide, así como con cánceres inflamatorios, donde modula los macrófagos asociados a tumores.
El kit de detección total de IRF5 en humanos y ratones sin biotina AlphaLISA SureFire es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de IRF5 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free
El ensayo Total-AlphaLISA Surefire Ultra Biotin Free mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.
El ensayo Total-AlphaLISA Surefire Ultra utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con un agente patentado CaptSure 3 para capturar uno de los anticuerpos de detección, marcado con una etiqueta CaptSure 3. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadora y aceptora, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa Optiplate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free se puede realizar en una sola placa para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la robusta calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Versatilidad de ensayos
Expresión de IRF5 en varias líneas celulares
Las líneas celulares adherentes se sembraron en una placa de 96 pocillos (40.000 células/pocillo) y se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO₂. Las células se lisaron con 200 µL de tampón de lisis durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación (350 rpm).
Las líneas celulares en suspensión se sembraron en una placa de 96 pocillos (400 000 células/pocillo) y se lisaron con 200 µL de tampón de lisis durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación (350 rpm).
Los niveles de IRF5 se evaluaron mediante el ensayo AlphaLISA SureFire Biotin Free. Para la detección, se transfirieron 10 µL (aproximadamente 2000 células adherentes y 20 000 células en suspensión) de lisado celular a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguida de 5 µL de mezcla aceptora y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donante a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un analizador Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
La expresión de IRF5 varía entre líneas celulares humanas y murinas. Se detectaron altos niveles de expresión en THP-1, RPMI 8226 y RAW 264.7.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire sin biotina
Modalidad de detección alfa
Kit de grupo de productos
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-IRF5
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área terapéutica-Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo