Revvity, ASBF-TST4-A10K, kit de detección de STAT4 total humano sin biotina AlphaLISA, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El Transductor de Señales y Activador de la Transcripción 4 (STAT4) es un factor de transcripción que media las respuestas celulares a la IL-12 y a los interferones tipo I, desempeñando un papel esencial en la diferenciación de las células Th1 y la activación de las células NK. STAT4 se activa por fosforilación en Tyr693, lo que conduce a la dimerización y la translocación nuclear. STAT4 activado induce la expresión de IFN-γ y T-bet, promoviendo las respuestas Th1 y la inmunidad celular contra patógenos intracelulares. STAT4 contribuye a la patogénesis de enfermedades autoinmunes, con variantes genéticas asociadas a un mayor riesgo de artritis reumatoide y lupus. La modulación de la actividad de STAT4 representa una oportunidad terapéutica para mejorar la inmunidad o atenuar las respuestas Th1 patológicas.
El kit de detección de STAT4 total humano sin biotina AlphaLISA SureFire es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de STAT4 total en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Biotin Free son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos
Muestras ricas en biotina

Los kits AlphaLISA SureFire Biotin Free se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-AlphaLISA SureFire Biotin Free
El ensayo Total-AlphaLISA Surefire Biotin Free mide el nivel de expresión de una proteína objetivo en un lisado celular.
El ensayo Total-AlphaLISA Surefire utiliza dos anticuerpos que reconocen dos epítopos distales diferentes en la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con un agente patentado CaptSure 3 para capturar uno de los anticuerpos de detección, marcado con una etiqueta CaptSure 3. En presencia de la proteína diana, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadora y aceptora, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de luz emitida es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-AlphaLISA SureFire Biotin Free
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa Optiplate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-AlphaLISA SureFire Biotin Free. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Total-AlphaLISA SureFire
La detección de la proteína diana total con los reactivos AlphaLISA SureFire Biotin Free se puede realizar en una sola placa para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la robusta calidad de AlphaLISA SureFire.
Sensibilidad del ensayo
Sensibilidad del ensayo: dilución del lisado celular
El lisado celular se preparó a partir de células NK-92 privadas de IL-2 durante 18 horas y estimuladas con 200 ng/mL de IL-12 durante 30 minutos en HBSS + 0,1% de BSA. Las células se lisaron a una concentración de 3,2 x 106 células/mL con la adición de tampón de lisis 5X durante 10 minutos a temperatura ambiente con agitación.
El lisado se diluyó en serie en tampón de lisis y STAT4 fosfo (Tyr693), y los niveles totales se evaluaron con ensayos AlphaLISA SureFire Biotin Free. Para la detección, se transfirieron 10 µL de lisado a una placa OptiPlate blanca de 384 pocillos, seguidos de 5 µL de mezcla aceptora y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Finalmente, se añadieron 5 µL de mezcla donadora a cada pocillo y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en oscuridad. La placa se leyó en un analizador Envision con la configuración estándar de AlphaLISA.
Se indica el número aproximado de células por punto de datos. La línea punteada representa el fondo del ensayo. Este ensayo puede detectar la expresión de STAT4 hasta en 500 células por punto de datos.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-STAT4
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área terapéutica - Oncología de la inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo