Revvity, MPSU-PTERB3-K10K, kit de detección AlphaLISA Multiplex Human Phospho-ErbB3 (HER3) (Tyr1289 y Total), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El receptor tirosina-proteína quinasa (ErbB3), también conocido como receptor 3 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER3), es una proteína unida a la membrana codificada por el gen ERBB3. ErbB3 posee un dominio de unión a neuregulina, pero carece de un dominio quinasa activo. Por lo tanto, puede unirse a este ligando, pero no puede fosforilar proteínas para enviar la señal a la célula. Junto con otros miembros de la familia de receptores EGF con actividad quinasa, ErbB3 forma heterodímeros. Las vías que causan la proliferación o diferenciación celular se activan por heterodimerización. En el cáncer de mama humano y otros tumores como el de próstata y vejiga, la sobreexpresión de ErbB3 es un signo de mal pronóstico.
El kit de detección AlphaLISA SureFire Ultra Multiplex Human Phospho-ErbB3 (Tyr1289)/Total ErbB3 se utiliza para medir los niveles de ErbB3 (Tyr1289) fosforilado y total en lisados ​​celulares mediante un ensayo Alpha multiplexado sin lavado. No se requieren líneas celulares diseñadas específicamente. La señal de 615 nm (Eu) corresponde al ErbB3 fosforilado y la señal de 545 nm (Tb) al análisis de ErbB3 total. Este kit ha sido formulado para ofrecer una excelente relación señal-fondo y funcionar sin interferencias en presencia de anticuerpos extraños, lo que lo hace ideal para el estudio de anticuerpos terapéuticos y bloqueantes.

Pasos sin lavado, sin pasos de separación
Ensayo de multiplexación
Detección sensible
Sin interferencia de anticuerpos exógenos
Resultados en menos de 3 horas

En este ensayo, la perla aceptora Alpha 615 se recubre con el anticuerpo CaptSure™, que se une al anticuerpo anti-fosfo-diana marcado con CaptSure. La perla aceptora Alpha 545 se recubre con el agente CaptSure2™, que se une al anticuerpo anti-proteína diana total marcado con CaptSure2. La perla donante Alpha se une al anticuerpo anti-proteína diana total biotinilado.
Cómo funciona
Principio del ensayo Multiplex SureFire Ultra
El ensayo Multiplex SureFire Ultra mide simultáneamente la fosfoproteína y la proteína total en niveles específicos. Utiliza tres anticuerpos que reconocen el epítopo fosfo y dos epítopos distales en la proteína diana. El ensayo requiere tres tipos de microesferas: dos microesferas aceptoras y una microesfera donante.

La perla aceptora Alpha 615 está recubierta con el anticuerpo CaptSure™, que se une al anticuerpo diana anti-fosfo marcado con CaptSure.
La perla aceptora Alpha 545 está recubierta con el anticuerpo CaptSure2, que se une al anticuerpo anti-proteína objetivo total marcado con CaptSure2.
La perla donante Alfa se une al anticuerpo anti-proteína diana total biotinilado.

Cuando la proteína fosforilada está presente, los tres anticuerpos acercan las esferas donadora y aceptora, lo que permite que el oxígeno singlete transfiera energía y excite ambas esferas aceptoras. Esto genera una señal alfa luminiscente a 615 nm y 545 nm. La señal de 615 nm (Eu) es directamente proporcional a la cantidad de proteína fosforilada, mientras que la señal de 545 nm (Tb) corresponde a los niveles totales de proteína.

Protocolo de ensayo de dos placas Multiplex SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa Optiplate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Multiplex SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir diferentes dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Multiplex SureFire Ultra
La detección de proteínas diana fosforiladas/totales con reactivos Multiplex SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la robusta calidad de AlphaLISA SureFire Ultra. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra Multiplex
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-ErbB3
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo