Revvity, MPSU-PTH2X-K500, kit de detección AlphaLISA Multiplex Human Phospho-H2AX (Ser139 y total), 500 puntos de ensayo

Descripción general
El miembro X de la familia de histonas H2A (H2AX) es un tipo de proteína histona codificada por el gen H2AFX. La fosforilación de H2AX en la serina 139 puede ocurrir cuando se rompe el ADN bicatenario, ya sea por radiación ionizante o por procesos fisiológicos endógenos. Esta modificación, denominada gamma-H2AX (fosfo-Ser139), desencadena la detención del ciclo celular y la reparación del ADN en respuesta al daño. El análisis de H2AX permite comprender mejor la estabilidad del genoma, el ciclo celular, la reparación del ADN y, en general, es un biomarcador para el cáncer y para las investigaciones del envejecimiento.
El kit de detección AlphaLISA SureFire Ultra Multiplex Human Phospho-H2A.X (Ser139)/Total H2A.X se utiliza para medir los niveles de H2A.X (Ser139) fosforilado y total en lisados ​​celulares mediante un ensayo Alpha multiplexado sin lavado. No se requieren líneas celulares diseñadas específicamente. La señal de 615 nm (Eu) corresponde al H2A.X fosforilado y la señal de 545 nm (Tb) al análisis de H2A.X total. Este kit ha sido formulado para ofrecer una excelente relación señal-fondo y funcionar sin interferencias en presencia de anticuerpos extraños, lo que lo hace ideal para el estudio de anticuerpos terapéuticos y bloqueantes.

Pasos sin lavado, sin pasos de separación
Ensayo de multiplexación
Detección sensible
Sin interferencia de anticuerpos exógenos
Resultados en menos de 3 horas

En este ensayo, la perla aceptora Alpha 615 se recubre con el anticuerpo CaptSure™, que se une al anticuerpo antifosfoproteína diana marcado con CaptSure. La perla aceptora Alpha 545 se recubre con el agente CaptSure2™, que se une al anticuerpo antiproteína diana total marcado con CaptSure2. La perla donante Alpha se une al anticuerpo antiproteína diana total biotinilado.
Cómo funciona
Principio del ensayo Multiplex SureFire Ultra
El ensayo Multiplex SureFire Ultra mide simultáneamente la fosfoproteína y la proteína total en niveles específicos. Utiliza tres anticuerpos que reconocen el epítopo fosfo y dos epítopos distales en la proteína diana. El ensayo requiere tres tipos de microesferas: dos microesferas aceptoras y una microesfera donante.

La perla aceptora Alpha 615 está recubierta con el anticuerpo CaptSure™, que se une al anticuerpo diana anti-fosfo marcado con CaptSure.
La perla aceptora Alpha 545 está recubierta con el anticuerpo CaptSure2, que se une al anticuerpo anti-proteína objetivo total marcado con CaptSure2.
La perla donante Alfa se une al anticuerpo anti-proteína diana total biotinilado.

Cuando la proteína fosforilada está presente, los tres anticuerpos acercan las esferas donadora y aceptora, lo que permite que el oxígeno singlete transfiera energía y excite ambas esferas aceptoras. Esto genera una señal alfa luminiscente a 615 nm y 545 nm. La señal de 615 nm (Eu) es directamente proporcional a la cantidad de proteína fosforilada, mientras que la señal de 545 nm (Tb) corresponde a los niveles totales de proteína.

Protocolo de ensayo de dos placas Multiplex SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa Optiplate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Multiplex SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir diferentes dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Multiplex SureFire Ultra
La detección de proteínas diana fosforiladas/totales con reactivos Multiplex SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la robusta calidad de AlphaLISA SureFire Ultra. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra Multiplex
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis B
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-H2AX
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo