Revvity, MPSU-PTSM1-K50K, kit de detección AlphaLISA Multiplex Human Phospho-SMAD1 (Ser463/465 y total), 50 000 puntos de ensayo

Descripción general
SMAD1 es un factor de transcripción y mediador clave de la vía de señalización de la proteína morfogenética ósea (BMP), que forma parte de la superfamilia del factor de crecimiento transformante β (TGF-β). Regula genes implicados en el crecimiento celular, la diferenciación, la apoptosis y el desarrollo embrionario. Tras la activación del receptor BMP, SMAD1 se fosforila y forma un complejo con SMAD4, translocándose al núcleo para impulsar la expresión génica. SMAD1 es esencial para la formación temprana de patrones embrionarios, en particular en la formación del eje dorso-ventral y la inducción del mesodermo, y desempeña un papel fundamental en la diferenciación de osteoblastos y la condrogénesis, lo que la hace vital para el desarrollo esquelético y la homeostasis. La señalización desregulada de SMAD1 está implicada en la fibrosis, los trastornos esqueléticos y cánceres como el glioblastoma y el cáncer de mama.
El kit de detección Multiplex SureFire Ultra SMAD1 Fosfo (Ser463/465) + SMAD1 Total se utiliza para medir los niveles de SMAD1 endógeno, tanto fosforilado como total, en lisados ​​celulares mediante un ensayo multiplexado AlphaLISA™ sin lavado. No se requieren líneas celulares diseñadas específicamente. La señal de 615 nm (Eu) corresponde al análisis de SMAD1 fosforilado, y la señal de 545 nm (Tb) al análisis de SMAD1 total. Este kit ha sido formulado para ofrecer una excelente relación señal-fondo y funcionar sin interferencias en presencia de anticuerpos externos, lo que lo hace ideal para el estudio de anticuerpos terapéuticos y bloqueantes.

Pasos sin lavado, sin pasos de separación
Ensayo de multiplexación
Sin interferencia de anticuerpos exógenos
Resultados en menos de 3 horas

En este ensayo, la perla aceptora Alpha 615 se recubre con el anticuerpo CaptSure™, que se une al anticuerpo antifosfoproteína diana marcado con CaptSure. La perla aceptora Alpha 545 se recubre con el agente CaptSure2™, que se une al anticuerpo antiproteína diana total marcado con CaptSure2. La perla donante Alpha se une al anticuerpo antiproteína diana total biotinilado.
Cómo funciona
Principio del ensayo Multiplex SureFire Ultra
El ensayo Multiplex SureFire Ultra mide simultáneamente el fosforo y la proteína total a un nivel específico. Utiliza tres anticuerpos que reconocen el epítopo fosforo y dos epítopos distales en la proteína diana. El ensayo requiere tres tipos de microesferas: dos microesferas aceptoras y una microesfera donante.

La perla aceptora Alpha 615 está recubierta con el anticuerpo CaptSure™, que se une al anticuerpo diana anti-fosfo marcado con CaptSure.
La perla aceptora Alpha 545 está recubierta con el anticuerpo CaptSure2, que se une al anticuerpo anti-proteína objetivo total marcado con CaptSure2.
La perla Alpha Donor se une al anticuerpo anti-proteína diana total biotinilado.

Cuando la proteína fosforilada está presente, los tres anticuerpos acercan las esferas donadora y aceptora, lo que permite que el oxígeno singlete transfiera energía y excite ambas esferas aceptoras. Esto genera una señal alfa luminiscente a 615 nm y 545 nm. La señal de 615 nm (Eu) es directamente proporcional a la cantidad de proteína fosforilada, mientras que la señal de 545 nm (Tb) corresponde a los niveles totales de proteína.

Protocolo de ensayo de dos placas Multiplex SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa Optiplate de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Multiplex SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir diferentes dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Multiplex SureFire Ultra
La detección de proteínas diana fosforiladas/totales con reactivos Multiplex SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo la robusta calidad de AlphaLISA SureFire Ultra. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra Multiplex
Modalidad de detección alfa
Kit de grupo de productos
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-SMAD1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 50.000 puntos de ensayo