Revvity, PWTBARR2, plásmido HTRF β-arrestina 2, 10 µg

Descripción general
Este plásmido, que codifica la beta-arrestina 2, está diseñado como complemento del kit de reclutamiento de beta-arrestina 2 HTRF (62BDBAR2PEB/C) y del kit celular de beta-arrestina 2 total HTRF (64BAR2TPEB/C). Permite la sobreexpresión de beta-arrestina 2 en líneas celulares con bajos niveles endógenos de esta proteína y ayuda a mejorar la ventana de ensayo resultante. Se recomienda especialmente su uso en líneas celulares CHO, que de otro modo podrían resultar difíciles de usar en ensayos de reclutamiento de beta-arrestina debido a su baja expresión de la proteína.
Los ensayos Tag-lite ofrecen muchas características y aplicaciones en comparación con los ensayos tradicionales de unión de receptor/ligando:

No radiactivo
Homogéneo y sin filtración
Kits y reactivos listos para usar para ensayos de unión
No altera la farmacología del receptor.
Tecnología validada y revisada por pares
Estudios cinéticos exhaustivos con valores reales de Kd y Ki, constantes de velocidad de asociación (Kon) y disociación (Koff)
Cribado y elaboración de perfiles de productos biológicos y moléculas grandes
Cómo funciona
Principio de transfección del plásmido beta-arrestina HTRF WT
Las células CHO o HEK293 estables que expresan GPCR se siembran a razón de 80 000 células/pocillo en una placa de 96 pocillos y se incuban durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2.
A continuación, se retira el medio y se añaden al pocillo 50 µL de una mezcla de lipofectamina + ADN en optiMEM sin SVF. Se recomienda encarecidamente analizar tres cantidades diferentes de plásmido de beta-arrestina 2 para asegurar la identificación de los mejores resultados del kit de reclutamiento de beta-arrestina 2, por ejemplo, 5, 10 y 20 ng de plásmido de beta-arrestina 2.
Después de 6 h de incubación a 37°C, se añaden al pocillo 100µL de medio con SVF y 5% de CO2.
Después de 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células están listas para realizar diversos ensayos.

Recomendamos trabajar con dos placas diferentes para el proceso de transfección. La primera placa se utiliza para ejecutar el ensayo de reclutamiento de beta-arrestina 2 en las células tratadas con concentraciones crecientes de compuestos (evaluación de la ventana de ensayo y CE50 para las diferentes cantidades de plásmido). La segunda placa se utiliza para ejecutar los ensayos HTRF Total Beta-arrestina 2 y HTRF Total AP2, y evaluar los niveles de expresión de beta-arrestina 2 y AP2 tras la transfección. Aplicación: Detección de segundos mensajeros.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos: reactivo fluorescente
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo-GPCR
Tecnología-TR-FRET
Tamaño unitario: 3 viales