Thermo Fisher, 11635018, Celdas competentes ElectroMAX™ Stbl4™

Células competentes ElectroMAX™ Stbl4™. Las células competentes ElectroMAX Stbl4 están diseñadas específicamente para la clonación de insertos inestables. Esta cepa es un derivado de las células Stbl2 (diseñadas a partir de la cepa JM109/J5). Para mejorar el rendimiento, se introdujo la mutación gal, se restauró el alelo lon+ al tipo silvestre y se introdujo el episoma F′. La cepa Stbl4 conserva las propiedades genéticas de la cepa Stbl2 para el mantenimiento de insertos inestables, como secuencias retrovirales, repeticiones directas y genes de matriz en tándem. Además, se ha informado que la cepa Stbl4 se utiliza en el descubrimiento de metabolitos secundarios complejos y en la construcción y el mantenimiento de bibliotecas CRISPR.
Como células electrocompetentes, las células Stbl4 pueden alcanzar una alta eficiencia de transformación de >5 x 109 ufc/μg, lo que las hace ideales para aplicaciones complejas como la generación de ADNc, CRISPR y bibliotecas genómicas de insertos inestables, o el uso de una baja cantidad de ADN. Las células Stbl4 electrocompetentes son capaces de absorber y mantener plásmidos grandes (p. ej.,
ej., cósmidos de 50 kb y clones P1 de 100-200 kb). Las células Stbl4 también contienen un episoma F', lo que les permite servir como hospedador de ADN monocatenario, como los vectores de clonación M13mp, si se proporciona una capa de DH5αF′IQ para permitir la formación de placas. El marcador lacZΔM15 proporciona α-complementación del gen de la β-galactosidasa de pUC o vectores similares y, por lo tanto, puede utilizarse para el cribado azul-blanco de colonias en placas de agar que contienen X-gal o Bluo-gal e IPTG. La mutación ThemcrA y la deleción ThemcrBC-hsdRMS-mrrdeletion permiten la clonación de secuencias genómicas metiladas. Finalmente, la mutación TheendA1 aumenta considerablemente el rendimiento y la calidad del plásmido.
Características de la celda competente ElectroMAX Stbl4
• Proporcionan eficiencias de transformación de >5 x 109 ufc/μg
• El genotipo único estabiliza las repeticiones directas y las secuencias retrovirales
• La mutación mcrA y la deleción mcrBC-hsdRMS-mrr permiten la clonación de secuencias genómicas metiladas
• Apoyo al cribado azul-blanco de clones recombinantes debido a lacZΔM15
• Diseñado para proporcionar preparaciones de plásmidos de alto rendimiento para aplicaciones posteriores
El episoma F' estable permite el aislamiento de ADN monocatenario (ssADN). Propagación de ADN inestable y de gran tamaño con células de alta eficiencia de transformación. Muchas cepas celulares competentes presentan el genotipo recA1, lo que reduce la recombinación. Sin embargo, en algunos casos, el ADN que se intenta clonar aún es inestable en dichas células, posiblemente debido a la presencia de repeticiones invertidas o directas, o a tractos ricos en GC. Si bien estas secuencias son relativamente comunes en genomas eucariotas, son raras en E. coli. Por consiguiente, pueden producirse reordenamientos al introducir estas secuencias en cepas estándar de E. coli.
Genotipo:mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal–thi-1supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15Tn10(TetR)]Encuentre la cepa y el formato que se ajuste a sus necesidadesLas cepas Stbl están disponibles con una variedad de antecedentes genéticos.
La cepa Stbl3 está disponible en formato MultiShot para aplicaciones de alto rendimiento.
Las células competentes DH5αF´IQ de máxima eficiencia están disponibles en formato químicamente competente.
Explorar formatos de medios de crecimiento bacteriano Notas
• Para maximizar la estabilización de las repeticiones directas y las secuencias retrovirales, incube las células Stbl4 y realice estudios de expresión a 30 °C.
• Se requiere un aparato de electroporación de alto voltaje.
• Las secuencias del genoma de la cepa Stbl4 están disponibles en la base de datos NCBI GenBank con los números de acceso CP076043.
1 y CP076044.
1 (Assad y otros, 2021).
Resistencia bacteriana a los antibióticos: Sí (tetraciclina)
Detección azul/blanca: Sí (lacZΔM15)
Clonación de ADN metilado: Sí (mcrB, mrr)
Clonación de ADN inestable: Sí (recA1)
Contiene episoma F': Sí
Compatibilidad de alto rendimiento: baja
Mejora la calidad del plásmido: Sí (endA1)
Plásmido: Puede utilizarse para plásmidos >100 kb
Preparación de ADN no metilado: No
Línea de productos: ElectroMAX™
Tipo de producto: Células electrocompetentes
Cantidad: 5 x 100 μL
Reduce la recombinación: Sí (recA1)
Condición de envío: Hielo seco
Fago T1 - Resistente (tonA): No
Nivel de eficiencia de transformación: Alta eficiencia (>1 x 109 ufc/μg)
Formato: Tubo
Especie: E. coli (K12)
Tamaño de la unidad: cada una