Thermo Fisher, 16117, Kit de detección y pull-down de Ras activo

Kit de detección y extracción activa de Ras El kit de detección y extracción activa de Ras de Thermo Scientific permite el enriquecimiento selectivo y la detección de la GTPasa Ras unida a GTP a través de una interacción proteica específica con el dominio de unión a la proteína Raf1.
El kit de pull-down y detección de Ras activo incluye el dominio de unión a Ras (RBD) GST-Raf1 purificado, resina de glutatión agarosa, controles positivo y negativo (GTPγS y GDP, respectivamente), tampón de lisis/unión/lavado, anticuerpo anti-Ras, tampón de muestra SDS, columnas de centrifugación y tubos de recolección. El kit se validó utilizando lisados ​​de células NIH 3T3, una línea celular conocida por su alta actividad de Ras.
Características del kit de detección y extracción de Ras activo:
•Altamente sensible y preciso: los reactivos optimizados, el anticuerpo anti-Ras específico y el procedimiento Western blot garantizan controles precisos y resultados semicuantitativos.
•Validado: probado funcionalmente para la detección de Ras para garantizar la calidad y el rendimiento.
•Compatible: eficaz para una variedad de tipos de células de fuentes de ratón, rata y humano. Aplicaciones:
• Seguir la activación de Ras GTPasa durante la diferenciación celular, migración, división y reordenamiento del citoesqueleto.
• Estudiar el papel del Ras activo en el cáncer y la angiogénesis.
• Monitorizar la actividad de Ras después de la estimulación con factores de crecimiento.
• Análisis de inhibidores de moléculas pequeñas para determinar su efecto sobre la actividad de Ras. El kit de pull-down y detección de Ras activo se validó para la función y especificidad del método de enriquecimiento de Ras activo utilizando lisados ​​celulares tratados con GTPγS para activar Ras endógeno y se comparó con lisados ​​tratados con GDP para inactivar la GTPasa pequeña. El tratamiento con GTPγS atrapa Ras en la forma activa unida a GTP, lo que resulta en una señal potente cuando hay Ras endógeno presente. El tratamiento con GDP empuja Ras al estado inactivo unido a GDP, lo que resulta en poca o ninguna señal, independientemente de los niveles de proteína Ras. El kit está optimizado para la detección mediante Western blot con un anticuerpo secundario conjugado con HRP (IgG de cabra antirratón, n.° de pieza 31430) y sustrato quimioluminiscente Thermo Scientific SuperSignal West Pico (n.° de pieza 34080). Cada kit contiene suficientes componentes para 30 ensayos de pull-down.
Los componentes del kit también pueden utilizarse para la tinción inmunofluorescente. Se estimularon células neuronales NS-1 con NGF para estudiar la distribución espacial de Ras activo utilizando la proteína GST-RBD y el anticuerpo anti-Ras incluido en el kit.
Antecedentes de Ras: La superfamilia Ras de GTPasas, llamada así por el oncogén viral del sarcoma de rata, contiene numerosas isoformas de Ras, incluyendo K-Ras, H-Ras y N-Ras. Si bien las tres isoformas se expresan a diferentes niveles en distintos tipos de células, en general, las mutaciones activadoras de al menos una de estas isoformas están presentes en aproximadamente el 15 % de todos los cánceres. Las proteínas Ras actúan como iniciadores de la transducción de señales intracelulares desde moléculas extracelulares y se asocian con la membrana plasmática mediante la modificación lipídica y la prenilación de su extremo carboxiterminal. Estas modificaciones en el extremo carboxiterminal determinan la localización de Ras en distintos microdominios de membrana, lo que dicta la señalización posterior. Las vías de señalización de Ras afectan a numerosos procesos celulares, como la proliferación, la supervivencia, el tráfico vesicular y la expresión génica.
La señalización a través de Ras es fundamental para muchas respuestas celulares, y su activación está regulada por varias proteínas GEF y GAP. Las proteínas GEF median la activación de la GTPasa disociando el GDP del Ras inactivo para permitir su unión al GTP. Por el contrario, las proteínas GAP inactivan las GTPasas hidrolizando el GTP a GDP. Ras media la señalización descendente al interactuar con proteínas efectoras, como Raf y la quinasa PI3. Raf1 es una proteína quinasa de serina/treonina que forma parte de la vía de señalización de la quinasa MAP, que induce la activación de ERK y p38, lo que influye en la proliferación y la supervivencia. La señalización de la quinasa PI3 activa AKT y mTOR, fundamentales para el crecimiento y la supervivencia celular. Ras también es fundamental para la diferenciación y el desarrollo celular, incluyendo el desarrollo y la función de las células inmunitarias.
Más datos del producto
• Medir la activación de pequeñas GTPasas a través de sus efectores posteriores específicos
•Detección y localización de GTPasas activas en la diferenciación de células neuronales. Ensayo: Ensayo de cuantificación de proteínas.
Conjugado: HRP
Descripción: Kit de detección y pull-down Pierce Active Ras
Para usar con (aplicación): desplegable
Contenido del kit: Tampón de muestra SDS (2X), 1.
5 ml, vasos de centrifugación, 30 vasos, tampón de lisis/unión/lavado (1X), 100 ml, GTPγS (100X), 50 μl, proteína de fusión GST-Raf1-RBD, 1 vial, resina de glutatión agarosa, 3 ml, GDP (100X), 50 µl, anticuerpo anti-Ras, 5 unidades, 250 µl, tubos de recolección, 90 tubos
Cantidad: 30 reacciones
Propiedades del sustrato: sustrato a base de proteínas
Tipo de sustrato: Sustrato GTPasa
Objetivo: Quinasas (múltiples), fosfodiesterasas, ATPasas, GTPasas, fosfatasas
Método de detección: Western Blot, quimioluminiscencia
Formato del kit de inmunoensayo: Columna de centrifugación
Tipo de etiqueta: Sin etiqueta
Tamaño de la unidad: cada una