Thermo Fisher, 16119, Kit de detección y pull-down de Cdc42 activo

Kit de detección y extracción activa de Cdc42 El kit de detección y extracción activa de Cdc42 de Thermo Scientific es un kit completo para el enriquecimiento selectivo y la detección de la GTPasa Cdc42 unida a GTP a través de la interacción específica de la proteína con el dominio de unión a la proteína Pak1.
El kit de pull-down y detección de Cdc42 activo incluye el dominio de unión a la proteína GST-Pak1 (PBD) purificado, resina de glutatión agarosa, controles positivo y negativo (GTPγS y GDP, respectivamente), tampón de lisis/unión/lavado, anticuerpo primario anti-Cdc42, tampón de muestra, columnas de centrifugación y tubos de recolección. El kit se validó utilizando lisados ​​de células NIH 3T3, una línea celular con una actividad Cdc42 reconocida.
Características del kit de detección y pull-down Cdc42 activo:
•Altamente sensible y preciso: los reactivos optimizados, el anticuerpo anti-Cdc42 específico y el procedimiento Western blot garantizan controles precisos y resultados semicuantitativos.
•Validado: probado funcionalmente para la detección de Cdc42 para garantizar la calidad y el rendimiento.
•Compatible: eficaz con una variedad de tipos de células de fuentes de ratón, rata y humano. Aplicaciones:
• Seguir la activación de la GTPasa Cdc42 durante la diferenciación celular, la migración, la división y el reordenamiento del citoesqueleto.
• Estudiar la activación de Cdc42 durante la formación de filopodios
• Monitorizar la actividad de Cdc42 después de la estimulación con factores de crecimiento.
• Análisis de inhibidores de moléculas pequeñas para determinar sus efectos sobre la actividad de Cdc42. El kit de pull-down y detección de Cdc42 activo se validó para la función y especificidad del método de enriquecimiento de Cdc42 activo utilizando lisados ​​celulares tratados con GTPγS para activar Cdc42 endógeno y se comparó con lisados ​​tratados con GDP para inactivar la GTPasa pequeña. El tratamiento con GTPγS atrapa Cdc42 en la forma activa unida a GTP, lo que resulta en una señal potente cuando Cdc42 endógeno está presente. El tratamiento con GDP empuja Cdc42 al estado inactivo unido a GDP, lo que resulta en una señal mínima o nula, independientemente de los niveles de proteína Cdc42. Este kit está optimizado para la detección mediante Western blot con un anticuerpo secundario conjugado con HRP (IgG de cabra antirratón, n.º de pieza 31430) y sustrato quimioluminiscente Thermo Scientific SuperSignal West Pico (n.º de pieza 34080). El kit contiene componentes suficientes para 30 ensayos pull-down.
Antecedentes de Cdc42: Las GTPasas de la familia Rho desempeñan numerosas funciones celulares, como la señalización celular, la regulación transcripcional y la organización del citoesqueleto de actina. Esta familia de GTPasas comprende Rho (RhoA, RhoB y RhoC), Rac (Rac1, Rac2, Rac3 y RhoG), Cdc42 (Cdc42 y G25K), Rnd (Rnd1, Rnd2 y RhoE/Rnd3), la familia RhoBTB y la familia Miro. Estas GTPasas permiten la transducción de señales desde la membrana plasmática hasta el citosol a través de GPCR, tirosina quinasa, citocinas y receptores de adhesión. La unión a la membrana plasmática se logra mediante modificaciones del lípido geranilgeranilo en el extremo carboxilo terminal de la proteína. La activación de Cdc42 provoca la polimerización de los filamentos de actina y la formación de filopodios.
La subfamilia Cdc42 de RhoGTPasa ha sido menos bien caracterizada que las familias Rho y Rac. Tanto Cdc42 como Rac1 se activan a través de la señalización del receptor de tirosina quinasa, lo que conduce a la activación de la vía de la quinasa de estrés SAPK y p38. Cdc42 también es activado por el quimioatrayente fMLP en los neutrófilos. La fibronectina activa Cdc42 y Rac1 para inducir la propagación celular, y la estimulación con TNF-alfa e IL-1 resulta en cambios en el citoesqueleto de actina. Existe una comunicación cruzada significativa entre Cdc42 y Rac1, ya que actúan en vías superpuestas, y en algunos casos, Cdc42 puede actuar aguas arriba de Rac1 durante la transducción de señales. Algunas de las principales proteínas efectoras de Cdc42 son Pak1, N-WASP e IQGAP. Pak1 es una quinasa involucrada en la activación de JNK en la vía de estrés SAPK. N-WASP es un efector que induce la formación de filopodios, e IQGAP interactúa con los filamentos de F-actina. En neuronas en diferenciación, Cdc42 desempeña un papel activo en el crecimiento de las neuritas. Sin embargo, la familia Rho de GTPasas puede actuar de forma agonista durante la señalización celular y de forma antagonista durante la diferenciación.
Más datos del producto
• Medir la activación de pequeñas GTPasas a través de sus efectores específicos posteriores. Ensayo: Ensayo de cuantificación de proteínas.
Conjugado: HRP
Descripción: Kit de detección y pull-down Pierce Active Cdc42
Para usar con (aplicación): desplegable
Contenido del kit: Anticuerpo anti-Cdc42, 5 unidades, 300 µL, Tubos de recolección, 90 tubos, GDP (100X), 50 µL, Resina de glutatión agarosa, 3 mL, Proteína de fusión GST-Pak1-RBD, 1 vial, GTPγS (100X), 50 μL, Tampón de lisis/unión/lavado (1X), 100 mL, Tampón de muestra SDS (2X), 1.
5 ml, vasos giratorios, 30 vasos
Cantidad: 30 reacciones
Propiedades del sustrato: sustrato a base de proteínas
Tipo de sustrato: Sustrato GTPasa
Objetivo: Quinasas (múltiples), fosfodiesterasas, ATPasas, GTPasas, fosfatasas
Método de detección: Western Blot, quimioluminiscencia
Formato del kit de inmunoensayo: Columna de centrifugación
Tipo de etiqueta: Sin etiqueta
Tamaño de la unidad: cada una