Thermo Fisher, 16120, Kit de detección y pull-down de Rap1 activo

Kit de detección y extracción activa de Rap1 El kit de detección y extracción activa de Rap1 de Thermo Scientific Pierce es un kit completo para el enriquecimiento selectivo y la detección de la GTPasa Rap1 unida a GTP a través de la interacción específica de la proteína con el dominio de unión a la proteína RalGDS.
El kit de pull-down y detección de Rap1 activo incluye dominio de unión a Rap (RBD) GST-RalGDS purificado, resina de glutatión agarosa, controles positivos y negativos (GTPγS y GDP, respectivamente), tampón de lisis/unión/lavado, anticuerpo anti-Rap1, tampón de muestra, columnas de centrifugación y tubos de recolección. El kit se validó utilizando lisados ​​de células NIH 3T3, una línea celular con una actividad Rap1 reconocida.
Características del kit de detección y pull-down Active Rap1:
•Altamente sensible y preciso: los reactivos optimizados, el anticuerpo anti-Rap1 específico y el procedimiento Western blot garantizan controles precisos y resultados semicuantitativos.
•Validado: probado funcionalmente para la detección de Rap1 para garantizar la calidad y el rendimiento
•Compatible: eficaz con una variedad de tipos de células de fuentes de ratón, rata y humano. Aplicaciones:
• Seguir la activación de la GTPasa Rap1 durante la diferenciación celular, la migración, la división y el reordenamiento del citoesqueleto.
• Estudiar la señalización activa de Rap1 en las uniones y adherencias celulares
• Monitorizar la actividad de Rap1 después de la estimulación con factores de crecimiento
• Análisis de inhibidores de moléculas pequeñas para determinar sus efectos sobre la actividad de Rap1. El kit de pull-down y detección de Rap1 activo se validó para la función y especificidad del método de enriquecimiento de Rap1 activo utilizando lisados ​​celulares tratados con GTPγS para activar Rap1 endógeno y se comparó con lisados ​​tratados con GDP para inactivar la GTPasa pequeña. El tratamiento con GTPγS atrapa Rap1 en la forma unida a GTP (activa), lo que resulta en una señal potente cuando Rap1 endógeno está presente. El tratamiento con GDP empuja Rap1 al estado unido a GDP (inactiva), lo que resulta en una señal mínima o nula, independientemente de los niveles de proteína Rap1. Este kit se optimizó para la detección mediante Western blot utilizando un anticuerpo secundario conjugado con HRP (IgG de cabra anti-conejo, n.° de pieza 31460) y sustrato quimioluminiscente Thermo Scientific SuperSignal West Pico (n.° de pieza 34080). El kit contiene suficientes componentes para 30 ensayos de pull-down.
Antecedentes de Rap: Las GTPasas Rap forman parte de la familia Ras de GTPasas y están codificadas por Rap1a, Rap1b y Rap2. Las GTPasas Rap son estructuralmente similares a las GTPasas Ras y poseen proteínas efectoras y activadoras similares, aunque las GTPasas Rap tienen actividades funcionales diferentes a las de Ras. Mientras que Ras participa en la proliferación y supervivencia celular, Rap1 regula los reordenamientos del citoesqueleto, la adhesión celular y la formación de uniones celulares.
La especificidad de Rap1 y Ras está mediada por sus respectivos reguladores ascendentes y efectores descendentes. Los GEF para Rap contienen un dominio de homología CDC25 que media la reacción de intercambio GDP/GTP y un dominio REM (motivo de intercambio Ras). Algunos GEF de Rap incluyen C3G, Epac1 y 2, RasGRP2, PDZ-GEF1 y 2 y PLCε. El dominio de unión utilizado en este kit es RalGDS, un GEF que contiene un dominio RA con el que Rap1 tiene mayor afinidad de unión que Ras. Los RapGAP, incluyendo Rap1GAP y la familia Spa-1, insertan una cadena lateral de asparagina en el espacio de unión de nucleótidos para catalizar la reacción de hidrólisis de GTP. Las proteínas efectoras de Rap, como RAPL, Riam, AF-6, Krit1, RacGEF, Tiam1, Vav2, Rho GAP y ARAP3, participan en las uniones intercelulares y la adhesión, y suelen localizarse en la membrana o en las uniones intercelulares. Además de Ras, también existe interacción cruzada entre Rap y Rho GTPasas.
Más datos del producto
• Medir la activación de pequeñas GTPasas a través de sus efectores específicos posteriores. Ensayo: Ensayo de cuantificación de proteínas.
Conjugado: HRP
Descripción: Kit de detección y extracción Pierce Active Rap1
Para usar con (aplicación): desplegable
Contenido del kit: tubos de recolección, 90 tubos, GDP (100X), 50 µL, resina de glutatión agarosa, 3 mL, proteína de fusión GST-RalGDS-RBD, 1 vial, GTPγS (100X), 50 μL, tampón de lisis/unión/lavado (1X), 100 mL, tampón de muestra SDS (2X), 1.
5 ml, vasos de centrifugación, 30 vasos, anticuerpo anti-Rap1, 5 unidades, 50 µL
Cantidad: 30 reacciones
Propiedades del sustrato: sustrato a base de proteínas
Tipo de sustrato: Sustrato GTPasa
Objetivo: Quinasas (múltiples), fosfodiesterasas, ATPasas, GTPasas, fosfatasas
Método de detección: Western Blot, quimioluminiscencia
Formato del kit de inmunoensayo: columna de centrifugación
Tipo de etiqueta: Sin etiqueta
Tamaño de la unidad: cada una