Thermo Fisher, 16129, EZ-Link™ NHS-Destiobiotina

EZ-Link™ NHS-Desthiobiotin Thermo Scientific EZ-Link NHS-Desthiobiotin es un reactivo de marcado reactivo a amina, de membrana corta y permeable cuyo grupo similar a la biotina se puede eluir de la estreptavidina, lo que lo hace ideal para el marcado y la purificación de proteínas intracelulares.
Características de EZ-Link NHS-Destiobiotina:
•Destiobiotina: el análogo de la biotina permite una fácil elución de la estreptavidina, una característica ideal para aplicaciones de purificación por afinidad.
•Etiquetado de proteínas: etiquete anticuerpos o proteínas en muestras purificadas o mixtas para permitir una alta recuperación en ensayos de pull-down con perlas de estreptavidina
•Permeable a la membrana: logra un etiquetado intracelular con células intactas porque el reactivo pequeño y sin carga se difunde fácilmente a través de las membranas celulares.
Reactivo con aminas: reacciona con aminas primarias (-NH₂), como la cadena lateral de las lisinas (K) o los extremos amino de los polipéptidos. La destiobiotina NHS es una variante de la biotina que se activa como éster NHS para marcar covalentemente las aminas primarias (-NH₂) de proteínas u otras moléculas con grupos destiobiotina. La etiqueta de destiobiotina se une a la estreptavidina y a otras proteínas que se unen a la biotina con alta especificidad, pero se eluye fácilmente en condiciones suaves (p. ej.,
Por ejemplo, mediante desplazamiento competitivo con biotina libre regular. Por lo tanto, este reactivo constituye una alternativa útil a NHS-Biotin (n.º de pieza 20217) para las técnicas de avidina-biotina en las que se desea una elución no desnaturalizante de las proteínas marcadas. Esta variedad, la más simple y pequeña, de reactivo de destiobiotina amino-reactivo no tiene carga y es permeable a la membrana celular; por lo tanto, NHS-Destiobiotin puede utilizarse con células intactas para el marcaje intracelular de proteínas.
Destiobiotina vs. Biotina. La destiobiotina es un análogo de la biotina de un solo anillo, libre de azufre, que se une a la estreptavidina con una especificidad casi igual, pero con menor afinidad que la biotina (1/Kd = 10^11 vs. 10^15 M, respectivamente)[1-2]. En consecuencia, las proteínas cebo destiobiotiniladas y sus compañeros interactuantes pueden eluirse de forma fácil y específica de la resina de afinidad de estreptavidina utilizando condiciones suaves basadas en el desplazamiento competitivo con biotina libre. Para experimentos de ensayos de pull-down con muestras biológicas, esta característica de liberación suave de la destiobiotina también ayuda a minimizar la copurificación de moléculas biotiniladas endógenas, que permanecen unidas a la estreptavidina tras la elución de los complejos proteicos diana con biotina libre. El sistema de afinidad avidina-biotina modificado también elimina la necesidad de utilizar condiciones de elución agresivas que podrían disociar los complejos o dañar la proteína o célula diana. Las técnicas basadas en destiobiotina son ideales cuando se utilizan proteínas nativas o recombinantes que no se expresan con una etiqueta de fusión y cuando se aíslan proteínas capturadas en condiciones nativas, como cuando se apunta a células intactas o proteínas de la superficie celular.
Marcaje con reactivos de ésteres de NHS. Los ésteres de biotina (NHS) de N-hidroxisulfosuccinimida son el tipo más común de reactivo de biotinilación. Las biotinas activadas por NHS reaccionan eficientemente con grupos amino primarios (-NH₂) en soluciones alcalinas para formar enlaces amida estables. Las proteínas suelen tener varias aminas primarias disponibles como dianas para el marcaje, incluyendo la cadena lateral de residuos de lisina (K) y el extremo aminoterminal de cada polipéptido. La mayoría de los ésteres de sulfo-NHS son directamente solubles en agua, pero no permeables a la membrana. Los ésteres de NHS simples son menos solubles en soluciones acuosas, pero sí permeables a la membrana.
Permeabilidad celular: permeable a las células
Tipo de etiqueta: Biotina y análogos
Línea de productos: EZ-Link™
Tipo de producto: NHS-Destiobiotina
Cantidad: 50 mg
Fracción reactiva: éster activo, éster succinimidílico, éster NHS
Reactividad química: Amina
Etiqueta o colorante: Análogo de biotina
Solubilidad: DMF (dimetilformamida), DMSO (dimetilsulfóxido)
Espaciador: Corto
Tamaño de la unidad: cada una