Thermo Fisher, 16138, Kit de destiobiotinilación y pull-down EZ-Link™

Kit de destiobiotinilación y pull-Down EZ-Link™ El kit de destiobiotinilación y pull-Down EZ-Link de Thermo Scientific es un conjunto completo de reactivos para marcar con biotina proteínas purificadas y utilizarlas para purificar complejos de interacción utilizando resina de agarosa y estreptavidina con condiciones de elución suaves.
Características del kit de destiobiotinilación y pull-down EZ-Link:
•Sulfo-NHS-LC-Destiobiotina: etiqueta las proteínas con un compuesto similar a la biotina que se une específicamente a la estreptavidina, pero que también se eluye fácilmente en condiciones suaves.
•Ensayo pull-down: protocolo y reactivos simples y optimizados para marcar proteínas y recuperar (purificar) complejos de interacción de proteínas intactos y funcionales.
Kit completo: incluye reactivo de marcaje y columnas de desalinización para preparar proteínas de cebo, así como agarosa de estreptavidina y tampón de elución para la extracción. Este kit integral de marcaje y purificación utiliza sulfo-NHS-LC-destiobiotina, un reactivo éster de NHS aminorreactivo, para marcar eficazmente una muestra de proteína purificada o mixta y usarla como cebo para capturar y purificar interacciones proteicas. Las etiquetas de destiobiotina de las proteínas marcadas se unen a la estreptavidina con alta especificidad, pero eluyen fácilmente en condiciones muy suaves (p. ej.,...
Es decir, mediante desplazamiento competitivo con biotina libre regular. El sistema permite la captura y el aislamiento (pull-down) eficaces y suaves de complejos de interacción proteica específicos a partir de lisados ​​celulares mediante microesferas de estreptavidina agarosa. El kit completo incluye viales de 1 mg listos para usar con reactivo de destiobiotinilación, columnas de desalinización para procesar la proteína marcada y estreptavidina agarosa de alta capacidad con tampones para realizar fácilmente varios experimentos de pull-down a escala de microcentrífuga. Identifique interacciones novedosas entre una proteína conocida (cebo) y una diana previamente desconocida (presa), o confirme interacciones entre proteínas de cebo y presa conocidas.
La destiobiotina es un análogo de la biotina de un solo anillo, libre de azufre, que se une a la estreptavidina con una especificidad casi igual, pero con menor afinidad que la biotina (1/Kd = 10¹1 frente a 10¹5 M, respectivamente). En consecuencia, las proteínas cebo destiobiotiniladas y sus compañeros interactuantes pueden eluirse de forma fácil y específica de la resina de afinidad de estreptavidina utilizando condiciones suaves basadas en el desplazamiento competitivo con biotina libre. Para experimentos de ensayos de pull-down con muestras biológicas, esta característica de liberación suave de la destiobiotina también ayuda a minimizar la copurificación de moléculas biotiniladas endógenas, que permanecen unidas a la estreptavidina tras la elución de los complejos proteicos diana con biotina libre. El sistema de afinidad avidina-biotina modificado también elimina la necesidad de utilizar condiciones de elución agresivas que podrían disociar los complejos o dañar la proteína o célula diana. Las técnicas basadas en destiobiotina son ideales cuando se utilizan proteínas nativas o recombinantes que no se expresan con una etiqueta de fusión y cuando se aíslan proteínas capturadas en condiciones nativas, como cuando se apunta a células intactas o proteínas de la superficie celular.
La sulfo-NHS-LC-destiobiotina es una variante de la biotina que se activa como un éster de sulfo-NHS con un brazo espaciador de cadena larga (LC) para marcar covalentemente aminas primarias (-NH₂) de proteínas u otras moléculas con grupos destiobiotina. El formato sin pesaje (viales resellables de 1 mg) elimina las dificultades asociadas con el pesaje de pequeñas cantidades de reactivo y maximiza la protección del reactivo no utilizado contra la hidrólisis.
Ensayo: Purificación por afinidad
Para usar con (aplicación): Pull-Down (a base de biotina)
Para uso con (equipo): Microcentrífuga
Formato: Kit
Cantidad: Kit de 5 reacciones
Suficiente para: 5 reacciones
Objetivo: No específico del objetivo
Línea de productos: EZ-Link™
Tipo: Kit desplegable
Tamaño de la unidad: cada una