Thermo Fisher, 20148X, Kit de optimización y control LightShift™ EMSA

Kit de Optimización y Control de EMSA LightShift™. El Kit de Optimización y Control de EMSA LightShift de Thermo Scientific es un sistema extremadamente robusto y sensible para realizar ensayos de desplazamiento de movilidad electroforética (EMSA) con el fin de identificar y caracterizar las interacciones de unión proteína-ADN. El kit incluye reactivos para configurar y personalizar las reacciones de unión de ADN y un conjunto de control de ADN y extracto de proteína para probar el sistema.
Características del kit de control y optimización LightShift EMSA:
• Excelente para detectar proteínas de baja abundancia en extractos nucleares.
• Sensibilidad que supera los métodos radiactivos y de digoxigenina.
• Compatible con condiciones de unión previamente establecidas para interacciones populares entre ADN y proteína
Incluye el sistema de control EBNA para ayudar a los nuevos usuarios a desarrollar un ensayo funcional y comprender los métodos utilizados para confirmar la especificidad de la interacción de unión. El principio de detección LightShift EMSA es similar al de un Western blot. El ADN dúplex marcado con biotina se incuba con un extracto nuclear o factor purificado y se somete a electroforesis en un gel nativo. A continuación, el ADN se transfiere rápidamente (30 minutos) a una membrana de nailon positiva, se reticula mediante UV, se sonda con conjugado de estreptavidina-HRP y se incuba con el sustrato. El protocolo, desde el etiquetado hasta los resultados, se completa en un solo día.
La interacción de las proteínas con el ADN es fundamental para el control de numerosos procesos celulares, como la replicación, la recombinación y la reparación del ADN, la transcripción y el ensamblaje viral. Una técnica clave para estudiar la regulación génica y determinar las interacciones proteína-ADN es el ensayo de desplazamiento de movilidad electroforética (EMSA).
La técnica EMSA se basa en la observación de que los complejos proteína:ADN migran más lentamente que las moléculas de ADN libre cuando se someten a electroforesis en gel de poliacrilamida o agarosa no desnaturalizante. Dado que la velocidad de migración del ADN se modifica o retarda con la unión de la proteína, el ensayo también se conoce como ensayo de desplazamiento o retardo de gel. Hasta la concepción del EMSA, las interacciones proteína:ADN se estudiaban principalmente mediante ensayos de unión a filtros de nitrocelulosa.
Para realizar el ensayo, solo se necesita una diana de ADN purificada, marcada con biotina en sus extremos, el extracto proteico a analizar, una membrana de nailon y equipo básico de electroforesis. Las dianas de ADN pueden sintetizarse con marcadores de biotina 5' o 3' o marcarse tras la síntesis con el kit de marcaje de ADN con biotina en el extremo 3' de Thermo Scientific (n.° de producto 89818). Se pueden obtener extractos proteicos nucleares, citosólicos o de células completas mediante diversos métodos, incluido el kit de reactivos de extracción nuclear y citoplasmática Thermo Scientific NE-PER (n.° de producto 78833).
Más datos del producto
•Transfiera geles EMSA utilizando el Pierce G2 Fast BlotterEnsayo: Ensayo EMSA
Para usar con (equipo): generador de imágenes myECL™, película de rayos X
Incluye: tampón de unión 10X (1 mL), ADN de control de biotina-EBNA (50 μL), ADN de EBNA sin marcar (50 μL), extracto de EBNA (125 μL), poli dI·dC (125 μL), 50 % de glicerol (500 μL), 1 % de NP-40 (500 μL), 1 M de KCl (1 mL), 100 mM de MgCl2 (500 μL), 200 mM de EDTA pH 8.
0 (500 μL), tampón de carga 5X (1 mL)
Línea de productos: LightShift™
Tipo de producto: Kit de control y optimización LightShift EMSA
Cantidad: 100 Reacciones
Especificidad del objetivo: No específico del objetivo
Técnica: Gel Shift
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una