Thermo Fisher, 20158, Kit EMSA de ARN quimioluminiscente LightShift™ Thermo Scientific™

Kit EMSA de ARN quimioluminiscente LightShift™ Thermo Scientific™ El kit EMSA de ARN quimioluminiscente LightShift de Thermo Scientific proporciona una solución no radiactiva para estudiar las interacciones ARN-proteína mediante un ensayo de desplazamiento de movilidad electroforética (EMSA).
Características del kit EMSA de ARN quimioluminiscente LightShift:
•Sensible: detección quimioluminiscente comparable a la detección radiactiva
• Ahorro de tiempo: revele películas de rayos X después de exposiciones de 1 a 5 minutos, en comparación con las 16 horas de exposición necesarias con los sistemas radiactivos.
•Flexible: compatible con sondas de ARN biotiniladas mediante diferentes métodos.
•Fácil de usar: el kit completo incluye reactivos optimizados para reacciones de unión y detección de sondas de ARN
• No radiactivo: elimine la preocupación por los residuos de las sondas de ARN radiactivas. El kit EMSA de ARN utiliza sondas de ARN biotiniladas y un sistema de sustrato quimioluminiscente para lograr una detección rápida y segura de complejos ARN-proteína con una sensibilidad equivalente a la de los métodos isotópicos tradicionales de 32P. El kit completo incluye todos los reactivos necesarios para configurar y optimizar las condiciones de unión proteína-ARN, un control positivo para las interacciones proteína-ARN y reactivos para la detección quimioluminiscente de la interacción de ácidos nucleicos.
Acerca del kit LightShift Chemiluminescent RNA EMSA. El kit LightShift Chemiluminescent RNA EMSA es una técnica in vitro para la detección de interacciones proteína-ARN mediante cambios en los patrones de migración por electroforesis en gel, similar al popular ensayo de desplazamiento en gel de ADN. En un EMSA de ARN, se incuba una sonda de ARN marcada con una muestra de proteína para iniciar la unión. Una vez formado el complejo, la muestra se separa mediante electroforesis en gel de poliacrilamida no desnaturalizante. Dado que los complejos ARN-proteína migran más lentamente que las sondas de ARN libres, la diferencia resultante en la distancia de migración puede visualizarse con el ensayo de desplazamiento en gel de ARN. La especificidad de las interacciones ARN-proteína se valida mediante la competencia por la unión con el exceso de ARN no marcado, que disminuye la señal de las interacciones específicas. Generalmente, no se espera que las sondas de ARN mutadas o irrelevantes compitan por interacciones específicas y no deberían reducir la intensidad de los desplazamientos de banda específicos al detectarse en el EMSA. El kit completo LightShift Chemiluminescent RNA EMSA incluye todos los reactivos necesarios para configurar y optimizar un ensayo de desplazamiento de gel de ARN, incluido un control positivo para la formación de complejos de ARN-proteína.
El kit LightShift Chemiluminescent RNA EMSA utiliza sondas de ARN biotiniladas, estreptavidina-HRP y detección quimioluminiscente para ofrecer una sensibilidad similar a la de las sondas de ARN radiactivas, pero con una detección más rápida. Las sondas de ARN marcadas pueden adquirirse comercialmente o generarse mediante reacciones de transcripción in vitro con nucleótidos biotinilados o mediante la ligadura enzimática de marcadores de biotina al extremo 3' de una cadena de ARN utilizando el kit Thermo Scientific Pierce RNA 3' End Biotinilation. El kit LightShift Chemiluminescent RNA EMSA es eficaz para sondas de ARN biotiniladas mediante cualquiera de estos tres métodos; sin embargo, la estructura secundaria del ARN puede verse afectada por la incorporación interna de nucleótidos biotinilados durante la síntesis de sondas de ARN con transcripción in vitro. Por lo tanto, para ciertas interacciones, pueden requerirse sondas de ARN sintetizadas a medida o sondas biotiniladas en el extremo 3' para que se produzcan interacciones proteína-ARN adecuadas.
Acerca del control positivo del kit LightShift Chemiluminescent RNA EMSA El control positivo incluido en el kit LightShift Chemiluminescent RNA EMSA es la sonda de ARN del elemento sensible al hierro (IRE). Las reacciones de unión de IRE se configuran y detectan en paralelo con las otras muestras experimentales. En condiciones de privación de hierro, la proteína sensible al hierro (IRP) permanece unida al ARN IRE presente en la célula, suprimiendo eficazmente la traducción de la ferritina (una proteína de almacenamiento de hierro) y luego el receptor de hierro de la transferrina. En condiciones ricas en hierro, la actividad de unión de IRE se pierde y la ferritina y la transferrina se traducen. Este sistema es ubicuo y produce un desplazamiento de banda robusto. La incubación de la reacción de control positivo con un exceso molar de 200 veces de ARN IRE sin marcar reducirá la señal específica de desplazamiento de banda de IRE en aproximadamente un 70%, mientras que un exceso similar de una sonda de ARN no relacionada no reducirá significativamente el desplazamiento de banda de IRE. Estos controles se pueden utilizar en cada experimento de desplazamiento de gel de ARN para validar la configuración, la electroforesis, la transferencia y la detección adecuadas de la formación del complejo proteína-ARN.
Ensayo: Ensayo EMSA
Para usar con (equipo): generador de imágenes myECL™, película de rayos X
Número de reacciones: 100 reacciones
Línea de productos: LightShift™
Tipo de producto: Kit de ARN quimioluminiscente EMSA LightShift
Cantidad: 100 reacciones
Especificidad del objetivo: No específico del objetivo
Técnica: Quimioluminiscencia mejorada, transferencia de membrana, desplazamiento de gel
Método de detección: quimioluminiscencia
Formato: Kit
Tipo de muestra: proteína
Tamaño de la unidad: cada una