Thermo Fisher, 20160, Kit de biotinilación del extremo 3' de ARN Pierce™ Thermo Scientific™

Kit de biotinilación del extremo 3' de ARN Pierce™ Thermo Scientific™ El kit de biotinilación del extremo 3' de ARN Pierce de Thermo Scientific está optimizado para marcar el extremo terminal 3-prime de las sondas de ARN para facilitar su uso como sondas o dianas en EMSA y otros métodos para estudiar las interacciones proteína-ARN.
Características del kit de biotinilación del extremo 3' del ARN:
•No radiactivo: incorpora una etiqueta de biotina que permite una sensibilidad de detección similar a la radiactividad cuando se utiliza con sistemas de detección quimioluminiscentes.
•Rápido: el ARN se puede etiquetar en 0.
5-2 horas con un procesamiento posterior mínimo
•Fácil de usar: se incluyen ligasa de ARN y tampón de reacción optimizado
•Económico: solo una fracción del costo de comprar sondas de ARN biotiniladas sintéticas
•Etiquetado en el extremo: produce una alteración mínima de la estructura secundaria del ARN.
•Flexible: etiquete sondas de ARN sintéticas o transcritas in vitro que van de 22 a 450 nucleótidos. Este kit completo contiene una cadena de ARN sin marcar para usar como control positivo, un estándar de sonda de ARN biotinilado, inhibidor de ARNasa, glucógeno y reactivos que mejoran la ligadura.
El kit de biotinilación del extremo 3' del ARN utiliza la ARN ligasa T4 para conjugar un análogo de nucleótido único con el extremo 3' de una cadena de ARN. El exclusivo (bis)fosfato de citidina biotinilado utilizado en este kit permite que la ARN ligasa T4 fije una etiqueta de biotina única en sondas de ARN de diversa estructura secundaria y longitudes con una eficiencia superior al 70 %.
Las reacciones de marcaje realizadas con el kit de biotinilación del extremo 3' del ARN suelen requerir 50 pmol de ARN y un exceso de 20 veces el nucleótido biotinilado en una reacción de 2 horas a 16 °C. Las sondas de ARN más cortas con una estructura secundaria mínima se pueden ligar en 30 minutos a 37 °C (p. ej.,
p. ej., plantilla de ARN de la ARN polimerasa). Sondas de ARN grandes o estructuralmente complejas (p. ej.
ej., Let-7 y hTR) requieren tiempos de incubación más largos. La optimización de la eficiencia de la biotinilación de moléculas de ARN complejas se logra modificando la proporción de ARN a citidina biotinilada, aumentando el tiempo de incubación o añadiendo DMSO a la reacción de marcaje para desnaturalizar la estructura del ARN.
Tras la reacción de biotinilación del ARN, el ARN marcado se precipita fácilmente para eliminar los subproductos de la reacción. La biotina permite inmovilizar o detectar la sonda de ARN con estreptavidina para estudiar las interacciones del ARN.
es decir, ensayos de desplazamiento de movilidad electroforética de ARN, ensayos de pull-down de ARN) o para realizar ensayos de transferencia no radiactiva (i.
es decir, transferencia Northern y elaboración de perfiles de miRNA).
Línea de productos: Pierce™
Tipo de producto: Kit de etiquetado de ARN
Cantidad: 20 Reacciones
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una