Thermo Fisher, 20164, Kit de extracción magnética de ARN-proteína Pierce™ Thermo Scientific™

Kit de extracción magnética de ARN-proteína Pierce™ Thermo Scientific™ El kit de extracción magnética de ARN-proteína Pierce de Thermo Scientific ofrece a los investigadores un método optimizado y sólido para enriquecer las interacciones proteína-ARN utilizando ARN marcado en el extremo como cebo.
Características del kit de pull-down de proteína y ARN magnético:Directo: captura complejos de ribonucleoproteína directamente con ARN marcado en el extremo; no usa ni requiere anticuerpos para el pull-downFácil de usar: no se necesitan copas de centrifugación ni centrifugación para el enriquecimiento de RBP; procedimiento optimizado para un tiempo de manipulación mínimo (menos de 3 horas) después de la reacción de etiquetado de ARNFlexible: usa ARN transcrito in vitro o ARN sintético para el etiquetado de varias longitudes y complejidad; proteínas enriquecidas con éxito usando lisados ​​endógenos, sobreexpresados ​​y traducidos in vitroEspecífico: fondo de microesferas bajo; el ARN no relacionado o el ARN mutado no enriquecen significativamente las RBP específicasEconómico: menos costoso que comprar ARN marcado en el extremo sintetizado comercialmente, microesferas magnéticas y reactivos por separadoCompleto: contiene módulos de etiquetado y enriquecimiento con los tampones necesarios para el ensayo; Incluye ARN de control positivo, ARN de control negativo y anticuerpo RBP. El kit de pull-down de ARN magnético proporciona reactivos para enriquecer eficientemente las proteínas de unión al ARN (RBP) mediante ARN marcado en el extremo con microesferas magnéticas de destiobiotina y estreptavidina. El kit completo contiene reactivos suficientes para 20 reacciones de marcaje de ARN y 20 ensayos de pull-down de proteína-ARN. Este enriquecimiento directo de la interacción proteína-ARN ofrece una alternativa a la captura con anticuerpos de complejos o fracciones proteína-ARN incorporados al ácido nucleico. Una ventaja adicional del kit es que incluye controles validados tanto para el marcaje como para el ensayo de pull-down. El kit es compatible con diversas aplicaciones posteriores, como Western blot y espectrometría de masas (MS).
Incluye: El kit completo contiene el kit Pierce de destiobiotinilación del extremo 3' del ARN, controles de ARN positivos y negativos, microesferas magnéticas de estreptavidina compatibles con ácidos nucleicos y tampones para el enriquecimiento y la elución de RBP. Requiere: ARN y lisado (muestra experimental) proporcionados por el usuario. Aplicaciones: Análisis mutacional, análisis estructural-funcional, identificación de ARN: interacciones proteicas, análisis MS de ARN desconocido: pares o complejos de unión a proteínas. El uso de ARN marcado como cebo para el enriquecimiento de proteínas de unión al ARN ofrece ventajas frente al enriquecimiento con anticuerpos, ya que captura la interacción directamente. Este kit incluye el kit Pierce de destiobiotinilación del extremo 3' del ARN, que utiliza la ARN ligasa T4 para unir un único nucleótido de citidina bisfosfato a los extremos 3' del ARN monocatenario.
La destiobiotina puede utilizarse para la detección o como un marcador de afinidad eluible. La longitud del espaciador entre el nucleótido y la destiobiotina se ha optimizado para una unión eficiente a las microesferas sin comprometer la accesibilidad del ARN a la proteína.
El procedimiento de enriquecimiento de las proteínas de unión al ARN se ha optimizado para facilitar su uso. El ARN marcado se captura primero en las microesferas para orientarlo hacia la unión a proteínas. Las microesferas unidas al ARN se equilibran posteriormente en el tampón de unión a proteínas y ARN antes de añadir el lisado proteico. Tras el lavado, la muestra puede eluirse utilizando tampón de elución de biotina no desnaturalizante o tampón de carga SDS-PAGE. Las muestras eluidas están listas para diversas aplicaciones posteriores, como Western blot o espectrometría de masas.
El sistema de control para el ensayo pull-down utiliza ARN del receptor de andrógenos (RA) en la región 3' no traducida, ARN poli(A)25 y lisado de células de mamífero. La región 3' no traducida (UTR) proximal del ARN del receptor de andrógenos contiene regiones ricas en UC para las proteínas de unión HuR y Poly(C) (CP1 y 2). Estas proteínas de unión al ARN regulan la estabilidad del ARNm (HuR), así como su recambio y traducción (CP1 y 2). El ARN de control negativo, ARN poli(A)25, no contiene sitios de unión HuR ni poly(C) BP.
Formato: Kit
Contenido del kit: 50 pmol de ARN por reacción
Cantidad: Kit de 20 reacciones
Suficiente para: 20 reacciones
Capacidad (métrica): 1 mL
Línea de productos: Pierce™
Tipo: Kit de extracción de ARN-proteína
Tamaño de la unidad: cada una