Kit de células a CT™ de microARN TaqMan™ de Thermo Fisher, 4391848

Kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™. El kit Ambion™ TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ permite realizar perfiles de expresión de microARN (miARN) directamente a partir de células cultivadas, sin purificación de ARN. Este kit es el primero en ofrecer un flujo de trabajo simple y completo para el análisis de la expresión de miARN a partir de unas pocas muestras, o bien puede integrarse fácilmente en aplicaciones automatizadas de alto rendimiento.
• Solución completa y validada: el flujo de trabajo optimizado incluye reactivos de lisis celular, DNasa, reactivos TaqMan™ MicroRNA RT y TaqMan™ Universal PCR Master Mix
• Rápido, simple y conveniente: prepare muestras en 10 minutos; elimine el tedioso aislamiento de ARN
• Especificidad de referencia: obtenga resultados superiores con los reactivos de microARN TaqMan™
• Rendimiento robusto: resultados equivalentes al ARN purificado
Amplio rango dinámico de entrada: detección lineal de 10 a 100 000 células. Solución completa y validada. Con un método único para lisar células cultivadas, eliminando el ADN genómico y preservando la integridad del ARN, el kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ contiene reactivos de transcripción inversa (RT) TaqMan™ MicroRNA y la mezcla maestra universal para PCR TaqMan™ para análisis de PCR en tiempo real. El kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ ha sido ampliamente probado y validado con los ensayos TaqMan™ MicroRNA, que se venden por separado.
Preparación de muestras sencilla y práctica en 10 minutos. El kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ incorpora un sencillo procedimiento de preparación de muestras de 10 minutos (Figura 1) para su uso con 10–100.000 células/muestra cultivadas, ya sea en placas o tubos. Las células se lavan en PBS y se lisan durante 8 minutos a temperatura ambiente; el tratamiento con DNasa puede realizarse simultáneamente. La lisis finaliza a temperatura ambiente mediante una incubación de 2 minutos con solución de parada.
Los lisados ​​del kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ ya están listos para la transcripción inversa o pueden almacenarse a -20 °C hasta 5 meses. Dado que las muestras no se someten a un proceso de purificación de ARN, todas las especies de ARN pequeño están disponibles para su análisis. Al poder procesarse directamente en placas de cultivo (96 o 384 pocillos), se reduce la manipulación y el riesgo de pérdida o error de transferencia. No requiere calentamiento, lavado ni centrifugación; el kit simplifica enormemente un proceso tradicionalmente laborioso y laborioso, reduciéndolo a 10 minutos.
Especificidad de referencia: resultados superiores con los reactivos TaqMan™ MicroRNA. Applied Biosystems ha desarrollado una solución de vanguardia para el problema fundamental asociado con la corta longitud de los miRNA maduros. Los ensayos TaqMan™ MicroRNA (se venden por separado) incluyen un cebador de transcripción inversa de tipo tallo-bucle único y específico para la diana (Figura 2). La estructura tallo-bucle está diseñada para incorporar especificidad para el miRNA maduro diana, a diferencia de otros métodos que extienden y ceban indiscriminadamente todo el ARN de una muestra. Los reactivos TaqMan™ MicroRNA RT, incluidos en el kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™, se diseñaron específicamente para funcionar en conjunto con este innovador diseño de ensayo.
La capacidad de distinguir entre dianas de miARN maduras altamente homólogas es necesaria para un análisis preciso de la expresión de miARN. El kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™, junto con los ensayos TaqMan™ MicroRNA, proporciona la especificidad necesaria para distinguir entre dianas altamente homólogas, como se muestra en la Figura 3. En este ejemplo, se utilizaron lisados ​​del kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ o miARN purificado en PCR en tiempo real mediante ensayos TaqMan™ MicroRNA para detectar diferencias de una sola base en moldes de miARN añadidos exógenamente. La especificidad obtenida con los lisados ​​del kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ (Figura 3A) fue equivalente a la obtenida con ARN purificado (Figura 3B).
Rendimiento robusto: resultados equivalentes al ARN purificado. Este nuevo kit se ha probado exhaustivamente con una amplia selección de ensayos de microARN TaqMan™ y demuestra un rendimiento equivalente al obtenido con ARN purificado (Figura 4). El flujo de trabajo del kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ permite una evaluación insuperable de la expresión de miARN con más de 900 ensayos de microARN TaqMan™ disponibles.
Amplio rango dinámico de entrada: detección lineal de 10 a 100 000 células. Dado que los niveles de expresión de miARN pueden variar considerablemente según el tipo de muestra, la etapa de desarrollo o la progresión de la enfermedad, es fundamental contar con herramientas sensibles para el análisis de la expresión de miARN. Ahora, dianas de miARN que varían desde unas pocas copias hasta millones de copias pueden cuantificarse con precisión en el mismo experimento.
El kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ funciona de forma robusta con tan solo 10 células y hasta 100 000 células. Además, para maximizar la sensibilidad, el kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ permite que hasta el 33 % del volumen de la reacción de RT se componga de lisado de muestra (RT singleplex). La Figura 5 demuestra la linealidad y la sensibilidad de la detección de los lisados ​​del kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ en 5 logaritmos de entrada celular por reacción de lisis; los resultados fueron equivalentes a los del ARN purificado. Además, el amplio rango dinámico de los ensayos TaqMan™ MicroRNA no se ve afectado por los lisados ​​del kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ (datos no mostrados).
Rendimiento comprobado, comprobado en conjunto. Todos los componentes del kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ se han optimizado para un rendimiento consistente y fiable. Esto elimina las dudas que conlleva el montaje de kits separados para la preparación de muestras, la transcripción inversa y la PCR en tiempo real. El kit TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ se ha validado con los ensayos TaqMan™ MicroRNA para una mayor garantía de calidad.
Para usar con (equipo): Sistema 7000, Sistema 7300, Sistema 7500, Sistema 7900HT, Sistema de PCR en tiempo real rápido StepOnePlus™ de Applied Biosystems, StepOne™, Modo estándar, StepOnePlus™, Modo estándar, Sistemas QuantStudio 6 y 7 Pro, Sistema QuantStudio 7 Flex, Sistemas QuantStudio 3 y 5, Sistema QuantStudio 12k Flex, Sistema QuantStudio 6 Flex
Formato: Tubo
Características ecológicas: se utilizan menos recursos y se generan menos residuos, son menos peligrosos
Número de reacciones: 100 reacciones
Colorante de referencia pasivo: ROX (premezclado)
Polimerasa: ADN polimerasa
Línea de productos: Ambion™, Cells-to-CT™, TaqMan™
Tipo de producto: Kit de células de microARN a C
Cantidad: 100 reacciones
Transcriptasa inversa: M-MLV
Tipo de muestra: Célula
Condición de envío: Hielo seco
Suficiente para: 100 reacciones
Método de detección: cebador-sonda
Para uso con (aplicación): análisis de miRNA
Rendimiento de PCR rico en GC: alto
Método de PCR: RT-qPCR de 2 pasos
Velocidad de reacción: Estándar
Tamaño de la unidad: cada una