Kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ de Thermo Fisher, 4399003

El kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ permite utilizar la química y la instrumentación de PCR en tiempo real de ciclado rápido para realizar análisis de expresión genética directamente a partir de células cultivadas sin purificación de ARN.
El TaqMan™ Fast Cells-to-CTKit es:
• Completo: el flujo de trabajo optimizado incluye reactivos de lisis celular con eliminación de ADNg, mezcla de enzimas RT, tampón RT y TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix
• Rápido: prepare muestras a temperatura ambiente en 7 minutos, incluido el tratamiento con DNasa; TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix ofrece resultados de PCR en tiempo real en aproximadamente 35 minutos
• Conveniente: lisar las muestras en un tubo o directamente en placas de cultivo de 96 o 384 pocillos
• Robusto: realiza análisis de expresión genética en 10 a 100 000 células por muestra, con resultados equivalentes a los del ARN purificado.
Eficiente: contiene suficientes reactivos para generar 500 resultados de PCR en tiempo real a partir de 100 muestras iniciales. Solución completa y validada. La tecnología TaqMan™ Cells-to-CT™ ofrece un método único para lisar células cultivadas, eliminando el ADN genómico (ADNg) y preservando la integridad del ARN. Además, el kit contiene reactivos de transcripción inversa (RT) y la mezcla maestra universal para PCR TaqMan™ Fast para un análisis rápido de PCR en tiempo real. Además, ha sido ampliamente probado y validado con los ensayos de expresión génica TaqMan™, el estándar de referencia, que se venden por separado. Todos los componentes del kit se han optimizado para funcionar en conjunto y lograr un rendimiento consistente y fiable, eliminando las dudas que conlleva el montaje de kits separados para la preparación de muestras, la transcripción inversa y la PCR rápida en tiempo real.
Flujo de trabajo rápido y práctico. El kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ incorpora un sencillo procedimiento de preparación de muestras de 7 minutos (véase la figura) para su uso con de 10 a 100.000 células cultivadas directamente en placas de cultivo de 96 o 384 pocillos o en tubos. Las células se lavan en PBS y se lisan durante 5 minutos a temperatura ambiente; se puede realizar simultáneamente un tratamiento opcional con DNasa. La lisis finaliza a temperatura ambiente mediante una incubación de 2 minutos con solución de parada. El kit simplifica enormemente un proceso tradicionalmente laborioso y laborioso, reduciéndolo a 7 minutos.
Los lisados ​​ya están listos para la transcripción inversa con el sistema de RT optimizado incluido en el kit, o pueden almacenarse a -20 °C hasta 5 meses para su posterior análisis. La mezcla maestra universal TaqMan™ Fast PCR proporciona resultados sensibles y reproducibles aproximadamente tres veces más rápido que los reactivos e instrumentos de PCR estándar. La combinación de una preparación de muestras rápida y sencilla y resultados de PCR en tiempo real de ciclo rápido (∼35 minutos) permite una cuantificación de genes diana más rápida que la disponible anteriormente. El flujo de trabajo del kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ reduce el tiempo desde la muestra hasta el resultado en un 40 % o más, en comparación con la purificación de ARN tradicional y la PCR en tiempo real estándar.
Resultados robustos, sensibles y fiables. El análisis preciso de la expresión génica en una amplia gama de muestras de entrada para genes con diversos niveles de expresión ha sido tradicionalmente un reto para los investigadores. Por lo tanto, es fundamental contar con una solución robusta para el perfilado de ARN de unas pocas o muchas células. Se muestra la excelente linealidad de la señal (R² = 0).
997) observados con lisados ​​del kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ en 5 registros de entrada celular (10–105 células por reacción de lisis) (véase la figura). Por lo tanto, un solo kit permite analizar la expresión génica en muestras limitadas o densas, sin comprometer la integridad de los datos debido a los inhibidores de la PCR.
El rendimiento de la PCR de lisados ​​celulares con el kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ fue equivalente al del ARN purificado, utilizando la mezcla maestra TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix suministrada (véase la figura). Tanto los lisados ​​del kit TaqMan™ Cells-to-CT™ como el ARN purificado mostraron una detección lineal en un rango de 5 logaritmos de equivalentes de entrada celular. La mayor sensibilidad con la entrada de 10 células con lisados ​​del kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ en comparación con el ARN purificado, utilizando los mismos reactivos de RT y PCR, se debe a una retención más eficiente de las moléculas diana durante la preparación.
es decir, no hay pérdida de ARN típicamente asociada con la transferencia o el calentamiento de la muestra.
El kit TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ también demostró un rendimiento superior en comparación con el ARN purificado, sometido a transcripción inversa y amplificado por PCR con la RT y la Fast Master Mix del competidor Q. El rango dinámico observado con los reactivos del competidor Q con ciclado rápido fue de 10⁻ a 10⁻ equivalentes celulares, o 1 log menor que el de los lisados ​​del kit TaqMan™ Cells-to-CT™ o el ARN purificado amplificado con la TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix (véase la figura). La TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix está formulada para ofrecer resultados sensibles y reproducibles con mayor rapidez que con reactivos e instrumentos estándar, y es robusta en una amplia gama de genes diana y concentraciones.
Para usar con (equipo): Sistema rápido 7500, Sistema rápido 7900HT, StepOne™, Modo rápido, StepOnePlus™, Modo rápido
Formato: Tubo
Características ecológicas: se utilizan menos recursos y se generan menos residuos, son menos peligrosos
Número de reacciones: 100 reacciones
Colorante de referencia pasivo: ROX (premezclado)
Polimerasa: ADN polimerasa
Línea de productos: Ambion™, Cells-to-CT™, TaqMan™
Tipo de producto: Kit rápido de células a C
Cantidad: 100 reacciones
Transcriptasa inversa: M-MLV
Tipo de muestra: Célula
Condición de envío: Hielo seco
Suficiente para: 100 reacciones
Método de detección: cebador-sonda
Para usar con (aplicación): Expresión genética
Rendimiento de PCR rico en GC: bajo
Método de PCR: RT-qPCR de 2 pasos
Velocidad de reacción: rápida
Tamaño de la unidad: cada una