Thermo Fisher, 4458236, Kit qRT-PCR de célula única a CT™

El kit Ambion™ Single Cell-to-CT™ (400 reacciones) contiene un flujo de trabajo completo y validado para el análisis de la expresión génica en muestras de 1 a 10 células. Cada kit contiene reactivos para la preparación de muestras, la transcripción inversa, la preamplificación y la PCR cuantitativa, optimizados en un flujo de trabajo sencillo que se completa en tan solo 5 pasos (véase la figura).
Características principales del producto: Flujo de trabajo preoptimizado para RT-PCR en tiempo real a partir de células individuales. Máxima sensibilidad para el análisis de células individuales. Rendimiento y reproducibilidad superiores en comparación con métodos alternativos. Kit completo y práctico, protocolo fácil de seguir. El protocolo preoptimizado garantiza el éxito y ahorra tiempo. Cada flujo de trabajo comienza con una sencilla preparación de la muestra de 7 minutos, donde las células se lisan de forma eficaz y reproducible con un procesamiento mínimo en una solución compatible con la RT-PCR posterior, sin necesidad de purificación. A continuación, se utiliza Superscript™ RT para la transcripción inversa, TaqMan™ PreAmp Master Mix para amplificar el ADNc y TaqMan™ Gene Expression Master Mix para qPCR. Estos cuatro pasos se han desarrollado para ofrecer la máxima sensibilidad. La muestra celular completa se mantiene en el mismo pocillo durante todo el procedimiento, por lo que no se produce pérdida de muestra ni dilución del valioso material limitado que podría afectar la sensibilidad.
Sensibilidad de células individuales: La sensibilidad de los resultados de PCR en tiempo real puede verse afectada por la eficiencia de la preparación de la muestra, la transcripción inversa o la amplificación. El kit Single Cell-to-CT™ ha abordado cada uno de estos posibles problemas para crear una solución que permite un análisis fiable y robusto de la expresión génica a partir de células individuales con la máxima sensibilidad. La detección de equivalentes de células individuales con el kit Single Cell-to-CT™ demuestra una linealidad y sensibilidad adecuadas en los resultados de qPCR en comparación con un control de muestra de 100 células, con una excelente reproducibilidad técnica (véase la figura). Como era de esperar, las células individuales presentan una mayor variabilidad debido a su heterogeneidad biológica inherente. Además, mediante la inclusión de un paso de preamplificación de ADNc, las dianas de interés se amplifican con precisión antes de la PCR en tiempo real. Este paso crucial amplifica la señal de forma imparcial, ampliando el potencial de análisis de muestras limitadas. Se muestra la precisión y la mejora de la señal de un panel de 96 genes mediante preamplificación (véase la figura).
Rendimiento y reproducibilidad superiores en comparación con métodos alternativos. Los métodos tradicionales de preparación de muestras con disolventes orgánicos, filtros de fibra de vidrio o microesferas magnéticas no son adecuados para el análisis de células individuales debido a la pérdida de muestra por la precipitación, unión y elución incompletas del ARN. Además, la mayoría de los métodos caseros de células individuales, que implican una simple ebullición para lisar las células, carecen de la capacidad de inactivar las ARNasas endógenas para estabilizar los perfiles de expresión génica, lo que puede provocar la escisión química del ARN y la transferencia de inhibidores, incluida la contaminación del ADNg, lo que puede afectar a todas las aplicaciones de qRT-PCR. Por el contrario, el kit Single Cell-to-CT™ muestra una sensibilidad y reproducibilidad superiores para el análisis de células individuales en comparación con los métodos tradicionales de purificación o ebullición casera (véase la figura).
Para usar con (equipo): Sistema 7000, Sistema 7300, Sistema 7500, Sistema rápido 7900HT, Sistema 7900HT, GeneAmp 9700, GeneAmp™ 2400, StepOne™, Modo rápido, StepOne™, Modo estándar, StepOnePlus™, Modo rápido, StepOnePlus™, Modo estándar, Termociclador Veriti
Características ecológicas: se utilizan menos recursos y se generan menos residuos, menos peligros.
Número de reacciones: 400 reacciones
Línea de productos: Ambion™, Cells-to-CT™
Tiempo de purificación: 7 min.
Cantidad: 400 reacciones
Tipo de muestra: células de mamíferos
Condición de envío: Hielo seco
Material de partida: 1-10 células
Método de detección: TaqMan
Para usar con (aplicación): RT-PCR
Método de PCR: RT-qPCR de 2 pasos
Velocidad de reacción: 7 min.
Tamaño de la unidad: cada una