Thermo Fisher, 70025Z10KU, exonucleasa del gen 6 de T7

Thermo Fisher, 70025Z10KU, Exonucleasa T7 Gen 6. La exonucleasa T7 Gen 6 hidroliza ADN dúplex de forma no procesiva en la dirección 5'→3', tanto a partir de nucleótidos 5'-fosforílicos como 5'-hidroxilados, liberando oligonucleótidos y mononucleótidos, hasta que aproximadamente el 50 % del ADN es soluble en ácido. También degrada nucleótidos en los huecos y mellas del ADN bicatenario desde el extremo 5' y ARN de híbridos ARN:ADN en la dirección 5'→3'.
La exonucleasa del gen 6 de T7 es similar a la exonucleasa Lambda, ya que cataliza la hidrólisis gradual del ADN dúplex desde el extremo 5', liberando mononucleótidos 5'. Sin embargo, a diferencia de la exonucleasa Lambda, la enzima presenta baja procesividad y elimina tanto el extremo 5'-hidroxilo como el 5'-fosforilo.
También degrada el ARN y el ADN de los híbridos ARN:ADN en la dirección 5'→3', pero no puede degradar el ARN de doble cadena ni el de cadena simple.
Esta enzima se ha utilizado para generar plantillas de ADN monocatenario para secuenciación o análisis de SNP.
PropiedadesPeso molecular: 32 kDaPh óptimo: 7.
5Temperatura óptima: 37 °C Inactivación: 75 °C durante 10 min o añadir 2 μL de 0.
5M EDTA para un volumen de reacción de 50 μL.
InactivaciónCalentando a 75 °C durante 10 min o añadiendo 2 μL de 0.
5M EDTA para un volumen de reacción de 50 μL.
Pureza: Superior al 95 % de pureza, según SDS-PAGE. Analizado para detectar endonucleasas y ribonucleasas contaminantes.
Tampón de almacenamiento50 mM KPO4(pH 6.
5), 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% glicerol.
Condiciones del ensayoLa mezcla de reacción (50 μL) contiene 50 mM de Tris-HCl (pH 8.
1), 5 mM de MgCl₂, 20 mM de KCl, 5 mM de 2-mercaptoetanol, ADN bicatenario y enzima. La incubación se realiza a 37 °C durante 15 minutos.
Definición de unidadUna unidad es la cantidad de enzima necesaria para liberar 1 nmol de nucleótido soluble en ácido en 15 minutos a 37 °C en condiciones de ensayo estándar.
Concentración50 unidades/μLFuenteE. colicepa que contiene un clon sobreproductor de la exonucleasa del gen 6 de T7Prueba funcionalConversión de 0.
5 pmol de ADN λ a semimoléculas monocatenarias mediante 75 unidades de enzima en 30 minutos a 37 °C. Verificación mediante electroforesis en gel de agarosa.
Aplicaciones: 1. Digestión controlada por pasos de ADN bicatenario desde el extremo 5'. 2. Generación de plantillas de ADN monocatenario para secuenciación o análisis de SNP. Tampón compatible: Tampón de almacenamiento.
Tipo de producto: Exonucleasa T7
Cantidad: 10 kU
Enzima: Exonucleasa
Tamaño de la unidad: cada una