Thermo Fisher, 70775Z1000UN, ADN polimerasa Sequenase versión 2.0

Thermo Fisher, 70775Z1000UN, Sequenase versión 2.
0 ADN polimerasa Descripción:Sequenase™ Versión 2.
La ADN polimerasa 0 es una forma modificada genéticamente de la ADN polimerasa T7. A diferencia de la enzima de tipo salvaje, prácticamente no tiene actividad exonucleasa 3'→5'. Sequenasa versión 2.
La enzima 0 es altamente procesiva, incorpora análogos de nucleótidos (dlTP, tio-dNTP, didesoxi-NTP, etc.), no se ve obstaculizada por estructuras secundarias y puede llevar a cabo la síntesis por desplazamiento de cadena. Es una enzima excelente para la didesoxi-secuenciación y resulta útil en otras aplicaciones, especialmente cuando se desea la ausencia de actividad exonucleasa asociada.
Sequenase versión 2.
0 tiene dos subunidades: una es la tiorredoxina, proteína de E. coli (peso molecular 12 000), y la otra es una versión modificada genéticamente de la proteína del gen 5 del bacteriófago T7 (peso molecular 76 000). Los cambios genéticos en esta subunidad (una deleción de 28 aminoácidos mediante mutagénesis in vitro) eliminan toda la actividad medible de la exonucleasa sin modificar la actividad de la ADN polimerasa.
Propiedades:Peso molecular: Consta de dos subunidades, proteína del gen T7 5 modificada (76 kDa) y tiorredoxina de E. coli (12 kDa)PH óptimo: 7.
5Temperatura óptima: 37 °CRequisitos para el catión divalente: Mg2+, Mn2+Pureza:Más del 95 % de pureza según lo determinado por SDS-PAGE.
Probado para detectar endonucleasas y exonucleasas contaminantes de cadena simple y doble.
Tampón de almacenamiento: fosfato de potasio 20 mM (pH 7.
4), 1 mM de DTT, 0.
1mM EDTA, 50% glicerol.
Condiciones del ensayo: La mezcla de reacción (100 μL) contiene 40 mM de Tris-HCl (pH 7.
5), 10 mM de MgCl2, 5 mM de DTT, 0.
3 mM de dNTP y 5 μg de M13mp18 prehibridado con 5 pmol de cebador universal M13. Se añade la enzima a la mezcla de reacción precalentada (37 °C); la incubación se realiza a 37 °C durante 1 min.
Definición de unidad:Una unidad de enzima cataliza la incorporación de 1 nmol de nucleótido en forma insoluble en ácido en 30 segundos a 37 °C.
Concentración: 13 unidades/μL Tampón de dilución de sequenasa (1 ml incluido, PN 70765): 10 mM Tris-HCl (pH 7.
5), 5 mM de DTT, 0.
1 mM de EDTA.
Referencias:Tabor, S. y Richardson, CC (1989) J. Biol. Chem.
264, 6447-6458.
Wang, D., Coscoy, L., Zylberberg, M., Avila, PC, Boushey, HA, Ganem, D. y DeRisi, JL (2002)Proc Natl. Acad. Ciencia. Estados Unidos, 99, 15687-15692.
Paris, M. (1992) Comentarios 18, (No. 3), United States Biochemical Corporation, Cleveland, Ohio.
Tabor, S. y Richardson, CC (1987)Proc.
Natl. Acad Sci. USA84, 4767-4771.
Tabor, S. y Richardson, CC (1989)Proc.
Ciencias Académicas Nacionales
Estados Unidos86, 4076-4080.
Concentración: 13 unidades/μL
Descripción: Sequenase versión 2.
0 ADN polimerasa, 1000 unidades, concentración de 13 unidades/μL, forma modificada genéticamente de ADN polimerasa T7, 7.
5 pH, temperatura óptima 37°C
Para usar con (aplicación): secuenciación
Polimerasa: forma genéticamente modificada de la ADN polimerasa T7
Tipo de producto: Sequenase versión 2.
0 ADN polimerasa
Pureza: 0.
95
Cantidad: 1000 U
Tamaño de la unidad: cada una