Thermo Fisher, 720735KU, exonucleasa I, alta concentración (20 unidades/μL)

Concentración: 20 U/μL. Descripción: La exonucleasa I hidroliza el ADN monocatenario en dirección 3'→5', liberando los mononucleótidos 5' y dejando intacto el dinucleótido 5' terminal. La hidrólisis es procesiva y no puede continuar si el extremo 3' está fosforilado. La exonucleasa I puede utilizarse para medir la escisión endonucleolítica del ADN monocatenario circular cerrado covalentemente que reacciona con una endonucleasa de interés. Además, la actividad de la ADN helicasa puede medirse utilizando la exonucleasa I.
La exonucleasa I es particularmente útil en la preparación de productos de PCR para aplicaciones que involucran métodos de secuenciación o marcaje. Normalmente, el exceso de cebadores y cualquier otro ADN monocatenario extraño presente en los productos de PCR interfieren con las reacciones enzimáticas posteriores que involucran la síntesis de ADN. Las propiedades hidrolíticas de la exonucleasa I degradan todo el ADN monocatenario presente en la mezcla de PCR, lo que permite que el producto se utilice con mayor eficiencia en otras aplicaciones. Al combinarse con la fosfatasa alcalina de camarón (PN 78390) para la desfosforilación de dNTP, se elimina por completo el uso de métodos de purificación alternativos, como columnas, geles o separaciones magnéticas.
Para la limpieza por PCR con exonucleasa I, consulte el protocolo USB ExoSAP-IT. La adquisición de ExoSAP-IT proporciona una licencia para los métodos de limpieza por PCR con exonucleasa I y SAP.
Propiedades:Peso molecular: 55 kDaInactivación por calor: 80°C durante 15 min.
Se degrada a dinucleótidos terminales.
Degrada el ADN glicosilado.
Temperatura óptima: 37 °C. Pureza: superior al 95 % según SDS-PAGE. Analizado para detectar endonucleasas, exonucleasas bicatenarias y ribonucleasas contaminantes.
Tampón de almacenamiento: Tris-HCl 20 mM (pH 7.
5), 5 mM de 2-mercaptoetanol, 0.
5mM EDTA, 50% glicerol.
Condiciones del ensayo: La mezcla de reacción (100 μL) contiene 67 mM de tampón de glicina (pH 9.
5), 10mM2-mercaptoetanol, 6.
7 mM de MgCl2, 0.
5 mM de ADN desnaturalizado y enzima. Incubación a 37 °C durante 30 minutos.
Definición de unidad: Una unidad es la cantidad de enzima que cataliza la liberación de 10 nmol de nucleótido soluble en ácido del ADN desnaturalizado en 30 minutos a 37 °C en condiciones estándar.
Concentración:Concentración estándar: 10 unidades/μL, PN 70073Concentración alta: 20 unidades/μL, PN 72073Ensayo funcional:Producto de PCR tratado con exonucleasa I para degradar los cebadores no incorporados antes de realizar la reacción de secuenciación con Sequenase™ versión 2.
0 Kit de secuenciación de ADN polimerasa (PN 70170).
Referencias:GOLDMARK, PJ Y LINN, S. (1972)J. Biol. Chem.
247, 1849-1860.
ROSAMOND, J., TELANDER, KM Y LINN, S. (1979)J. Biol. Chem.
254, 8646-8652.
WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. Y FIEHN, W. (1994) Ácidos nucleicos Res.
22, 4354-4355.
HANKE, M. Y WINK, M. (1994)BioTechniques17, 858-860.
Tampón compatible: Tampón de almacenamiento, Tampón de glicina
Tipo de producto: Exonucleasa I
Cantidad: 5 unidades
Concentración: 20 U/μL
Enzima: Exonucleasa
Tamaño de la unidad: cada una