Thermo Fisher, 88311, sonda de destiobiotina-ATP ActivX™

Sonda de Destiobiotina-ATP ActivX™. Las sondas de Destiobiotina-ATP o ADP ActivX son derivados de nucleótidos que modifican covalentemente el sitio activo de las enzimas en residuos de lisina conservados en el sitio de unión del nucleótido. La estructura de estas sondas consiste en una biotina modificada (destiobiotina) unida al nucleótido mediante un enlace acil-fosfato lábil. La destiobiotina es un análogo de la biotina que se une con menor fuerza a las proteínas que la unen, lo que resulta en una unión que se revierte fácilmente mediante desplazamiento de la biotina, bajo pH o desnaturalización por calor.
Las sondas de enriquecimiento del sitio activo ActivX son ventajosas para determinar los niveles de enzimas activas mediante sondas con marcadores análogos, lo que permite el perfilado de enzimas tanto inactivas como activas. Las sondas ActivX de ATP y ADP marcan covalentemente el sitio activo de las ATPasas, incluyendo chaperonas y enzimas metabólicas, para permitir su enriquecimiento selectivo mediante una etiqueta de destiobiotina.
Las sondas de destiobiotina-ATP o ADP pueden utilizarse para enriquecer, identificar y perfilar selectivamente las clases de enzimas diana o evaluar la especificidad de los inhibidores enzimáticos. Dado que muchas ATPasas y otras proteínas de unión a nucleótidos se unen a nucleótidos o inhibidores incluso cuando están enzimáticamente inactivas, las sondas de destiobiotina permiten perfilar tanto las enzimas inactivas como las activas en una muestra compleja. La preincubación de muestras con inhibidores de moléculas pequeñas que compiten por los sitios activos puede utilizarse para determinar la afinidad de unión del inhibidor. Las sondas de nucleótidos de sitio activo también pueden utilizarse para identificar inhibidores no diana. Con el enriquecimiento selectivo, se pueden identificar y perfilar las clases de enzimas diana en diferentes muestras o evaluar la especificidad y la afinidad de los inhibidores enzimáticos.
Aplicaciones de las sondas ATP y ADP ActivX:
• Perfilar las afinidades de unión de moléculas pequeñas y la inhibición del sitio activo de manera dependiente de la dosis
• Identificar de docenas a cientos de objetivos inhibidores y objetivos no deseados de tejidos, células y proteomas subcelulares.
• Enriquecimiento de enzimas según su función. La evaluación del marcaje del sitio activo con sondas de destiobioína puede realizarse mediante Western blot o espectrometría de masas (EM). En el método Western blot, las proteínas marcadas con destiobiotina se enriquecen para su análisis por SDS-PAGE y su posterior detección con anticuerpos específicos. En el método MS, las proteínas marcadas con destiobiotina se reducen, alquilan y digieren enzimáticamente para obtener péptidos. Solo los péptidos del sitio activo marcados con destiobiotina se enriquecen para su análisis mediante LC-MS/MS. Ambos métodos permiten determinar la unión a dianas inhibidoras, pero solo MS permite identificar dianas inhibidoras globales y dianas inactivas.
Estos productos están sujetos a una licencia de etiqueta de uso limitado.
Ensayo: Ensayo de cuantificación de proteínas
Descripción: Sonda de destiobiotina-ATP ActivX™
Método de detección: quimioluminiscencia, espectrometría de masas, Western blot
Para usar con (aplicación): desplegable
Formato: Tubo, Columna de centrifugación
Formulación: Destiobiotina-ATP, PM 1259
Etiqueta o colorante: Biotina y otros haptenos
Cantidad: 16 x 12.
6 μg
Tipo de sustrato: sustrato de quinasa
Objetivo: Quinasas (múltiples), fosfodiesterasas, ATPasas, GTPasas, fosfatasas
Línea de productos: ActivX™
Tipo: Sonda de nucleótidos marcados
Tamaño de la unidad: cada una