Thermo Fisher, 88315, sonda de destiobiotina-GTP ActivX™

Sonda de Destiobiotina-GTP ActivX™. Las sondas de Destiobiotina-GTP ActivX™ contienen biotina modificada unida al nucleótido mediante un enlace acil-fosfato lábil. Las sondas de enriquecimiento del sitio activo ActivX son ventajosas para determinar los niveles de enzimas activas mediante el uso de sondas marcadas con análogos, lo que permite el perfilado de enzimas tanto inactivas como activas. Las sondas ActivX enriquecen selectivamente solo las enzimas funcionalmente activas y biológicamente relevantes en el momento del marcaje. Con el enriquecimiento selectivo, se pueden identificar y perfilar las clases de enzimas diana en diferentes muestras o evaluar la especificidad y la afinidad de los inhibidores enzimáticos.
Tras la eliminación de nucleótidos de GTP o GDP de las enzimas, la sonda de destiobiotina-GTP puede utilizarse para modificar covalentemente los residuos de lisina conservados en el sitio de unión de nucleótidos de la GTPasa. La destiobiotina-GTP permite enriquecer, identificar y perfilar selectivamente las clases de enzimas diana en las muestras. La preincubación de muestras con inhibidores de moléculas pequeñas que compiten con las sondas del sitio activo permite determinar la afinidad de unión del inhibidor y la especificidad de la diana. La sonda ActivX destiobiotina-GTP marca covalentemente el sitio activo de las GTPasas y las subunidades de GTPasa de los receptores acoplados a proteína G.
Aplicaciones de la sonda de destiobiotina-GTP ActivX:
• Amplio enriquecimiento de proteínas de unión a GTP de tejidos, células y proteomas subcelulares.
• Enriquecimiento de enzimas en función de su función
• Perfilado de decenas a cientos de dianas inhibidoras. La evaluación del marcaje del sitio activo con sondas de destiobioína puede realizarse mediante Western blot o espectrometría de masas (EM). En el método Western blot, las proteínas marcadas con destiobiotina se enriquecen para su análisis por SDS-PAGE y su posterior detección con anticuerpos específicos. En el método de EM, las proteínas marcadas con destiobiotina se reducen, alquilan y digieren enzimáticamente para obtener péptidos. Solo los péptidos del sitio activo marcados con destiobiotina se enriquecen para su análisis mediante LC-EM/EM. Ambos métodos permiten determinar la unión de la diana inhibidora, pero solo el método de EM permite identificar dianas inhibidoras globales y dianas inactivas.
Estos productos están sujetos a una licencia de etiqueta de uso limitado.
Ensayo: Ensayo de cuantificación de proteínas
Descripción: Sonda de destiobiotina-GTP ActivX
Método de detección: quimioluminiscencia, espectrometría de masas, Western blot
Para usar con (aplicación): desplegable
Formato: Tubo, Columna de centrifugación
Etiqueta o colorante: Biotina y otros haptenos
Cantidad: 16 x 12.
9 μg
Tipo de sustrato: Sustrato GTPasa
Objetivo: Quinasas (múltiples), fosfodiesterasas, ATPasas, GTPasas, fosfatasas
Línea de productos: ActivX™
Tipo: Sonda de nucleótidos marcados
Tamaño de la unidad: cada una