Thermo Fisher, 88316, sonda de serina hidrolasa ActivX™ Azido-FP

Sonda de serina hidrolasa ActivX™ Azido-FP. Las sondas ActivX™ FP contienen un grupo fluorofosfonato reactivo que marca específica y covalentemente la serina del sitio activo de las serina hidrolasas enzimáticamente activas. Estas sondas están disponibles con una etiqueta de destiobiotina (análogo de biotina) para enriquecimiento selectivo o con un grupo azido reactivo (reactivos de Staudinger) que facilita el marcaje multiplex cuando se utilizan con etiquetas derivatizadas con fosfina o alquino.
Las sondas de enriquecimiento del sitio activo ActivX son ventajosas para determinar los niveles de enzimas activas mediante sondas con análogos marcados, lo que permite el perfilado de enzimas tanto inactivas como activas. Las sondas ActivX enriquecen selectivamente solo las enzimas funcionalmente activas y biológicamente relevantes en el momento del marcaje. Con el enriquecimiento selectivo, se pueden identificar y perfilar las clases de enzimas diana en diferentes muestras o evaluar la especificidad y afinidad de los inhibidores enzimáticos.
Aplicaciones de las sondas ActivX FP:
• Determinar la actividad de la enzima serina hidrolasa en células y lisados
• Mapeo de la serina del sitio activo de miembros funcionalmente diversos de la familia de serina hidrolasas (p. ej.
p. ej. proteasas, lipasas, esterasas)
• Detección de afinidades de unión de moléculas pequeñas e inhibición del sitio activo
• Perfilar las serina hidrolasas mediante flujos de trabajo de fluorescencia, Western blot o espectrometría de masas. La superfamilia de las serina hidrolasas es una de las familias de enzimas más grandes y diversas en los proteomas eucariotas. Las serina hidrolasas se agrupan generalmente en dos grandes familias: serina proteasas (p. ej.,
ej., tripsina, elastasa y trombina) y serina hidrolasas metabólicas. Las serina hidrolasas metabólicas se dividen en múltiples subclases enzimáticas (p. ej.,
ej., esterasas, lipasas, amidasas y peptidasas) según su estructura, mecanismo catalítico y preferencia de sustrato. Estas sondas pueden utilizarse para evaluar la actividad o cribar inhibidores de moléculas pequeñas frente a enzimas derivadas de lisados ​​celulares, fracciones subcelulares, tejidos y proteínas recombinantes.
La evaluación del marcaje del sitio activo con sondas de destiobioína puede realizarse mediante Western blot o espectrometría de masas (EM). En el método Western blot, las proteínas marcadas con destiobiotina se enriquecen para su análisis por SDS-PAGE y su posterior detección con anticuerpos específicos. En el método MS, las proteínas marcadas con destiobiotina se reducen, alquilan y digieren enzimáticamente hasta obtener péptidos. Solo los péptidos del sitio activo marcados con destiobiotina se enriquecen para su análisis mediante LC-MS/MS. Ambos métodos permiten determinar la unión a dianas inhibidoras, pero solo el método MS permite identificar dianas inhibidoras globales y dianas inactivas. La sonda Azido-FP puede combinarse con una etiqueta derivatizada con fosfina o alquino para la detección o el enriquecimiento de serina hidrolasas mediante Western blot o espectrometría de masas.
Estos productos están sujetos a una licencia de etiqueta de uso limitado.
Ensayo: Ensayo de cuantificación de proteínas
Descripción: Sonda de serina hidrolasa azido-FP ActivX™
Método de detección: quimioluminiscencia, espectrometría de masas, Western blot
Para usar con (aplicación): desplegable
Formato: Tubo, Columna de centrifugación
Formulación: Azido-fluorofosfonato, PM 350
Etiqueta o tinte: haga clic en Etiqueta de química
Cantidad: 3.
5 μg
Tipo de sustrato: Sustrato de serina hidrolasa
Objetivo: Serina hidrolasa
Línea de productos: ActivX™
Tipo: Sonda de fluorofosfonato (FP)
Tamaño de la unidad: cada una