Thermo Fisher, A13286, Sistemas de ensamblaje genético de alto orden GeneArt™, con medios de cultivo de levadura

Sistemas de Ensamblaje Genético de Alto Orden GeneArt™ con medios de cultivo de levadura. El Sistema de Ensamblaje Genético de Alto Orden GeneArt® es un kit altamente eficiente para el ensamblaje simultáneo y continuo de hasta 10 fragmentos de ADN, con una longitud total de hasta 110 Kbp, en cualquier vector. El sistema se basa en la capacidad de la levadura para absorber y recombinar fragmentos de ADN con alta eficiencia. Esto reduce considerablemente la manipulación in vitro del ADN y elimina la necesidad de tratamientos enzimáticos, como la restricción y la ligadura, a la vez que permite fusiones precisas de secuencias de ADN. El kit contiene materiales para la transformación y purificación de levadura, incluyendo medios selectivos de levadura y E. coli competente para la amplificación plasmídica de clones correctos.
• Fácil y potente: clona hasta 10 fragmentos de ADN, con la secuencia de tu elección, simultáneamente en un solo vector (hasta 110 Kbp); no requiere sitios de restricción de digestión, ligadura o recombinación.
• Precisión y eficiencia: diseñado para permitirle clonar lo que quiera, donde quiera, en la orientación que quiera y lograr hasta un 90 % de clones correctos sin dejar secuencias adicionales.
•Flexibilidad: utilice nuestro vector lineal, un vector de su elección o clone fragmentos de ADN preexistentes que no tengan homología final sin modificaciones adicionales.
• Herramientas gratuitas: diseñe oligos de ADN y más con nuestra interfaz web gratuita que lo guía a través de su proyecto paso a paso.
Diversas aplicaciones: Optimice diversas técnicas de biología sintética y molecular mediante la rápida combinación, adición, deleción o intercambio de segmentos de ADN. Para la clonación de 1 a 4 fragmentos de ADN de tamaño limitado, y si prefiere un enfoque in vitro, considere el kit de clonación y ensamblaje GeneArt® Seamless (cat. n.° A13288). Cree fácilmente nuevas construcciones específicas a partir de diversos fragmentos de ADN. El sistema de ensamblaje genético de alto orden GeneArt® aprovecha la recombinación asociada a la transformación (TAR) en la levadura Saccharomyces cerevisa para unir fragmentos de ADN preexistentes u oligonucleótidos sintetizados químicamente en una única molécula recombinante. Los fragmentos de ADN y el vector linealizado se unen basándose en la homología terminal compartida. Si no existe dicha homología terminal entre las piezas, se pueden unir mediante enlazadores de recombinación, oligonucleótidos de ADN sintéticos que proporcionan homología terminal entre dos fragmentos de ADN no relacionados. El proceso es muy eficiente y continuo, sin dejar secuencias adicionales tras el ensamblaje. Aunque se ha demostrado su eficacia con fragmentos de ADN de hasta 0,5 Mb y 50 fragmentos, este producto se ha optimizado para hasta 110 Kb y 10 fragmentos de ADN en un vector. Verificación simple de clones. Para minimizar el trabajo en levadura, los clones de levadura recombinante se someten a un protocolo simplificado de extracción de ADN de 10 minutos. La extracción produce suficiente cantidad de moléculas ensambladas para la verificación de las uniones mediante PCR de colonias, así como para la transformación directa de células de E. coli para su posterior análisis. El kit incluye el tampón de lisis patentado y las microesferas de vidrio necesarias para la extracción. Consideraciones para la elección de un vector de clonación: El sistema de ensamblaje genético de alto orden GeneArt® requiere vectores lanzadera de alta capacidad y compatibles con levadura y E. coli (es decir, vectores lanzadera BAC-YAC). Este producto no incluye un vector de clonación, pero ofrecemos por separado un vector de clonación lineal listo para usar, el GeneArt® pYES1L Vector with Sapphire Technology™ (cat. n.° A13287). También puede usar su propio vector, pero debe ser compatible con el Sistema de Ensamblaje Genético de Alto Orden. Esta compatibilidad se logra fácilmente con nuestro Casete de Conversión de Vectores de Alto Orden GeneArt® (cat. n.° A13291). Eficiencia de Clonación: En el Ensamblaje de Alto Orden GeneArt®, los principales factores que afectan la eficiencia de la clonación son el tamaño de los elementos de ADN, el número de aquellos sin homología terminal, el tamaño total de la molécula final y la calidad y especificidad del fragmento. El extremo terminal de los fragmentos de PCR (extremos salientes A o romos) no afecta la eficiencia de la clonación. Las eficiencias de clonación típicas para diferentes números de fragmentos con homología terminal ensamblados en el Vector GeneArt® pYES1L con Tecnología Zafiro™ son las siguientes:
• >90% para 5 fragmentos de ADN de 10 Kb cada uno
• >90% para 10 fragmentos de ADN de 5 Kb cada uno
• >50% para 10 fragmentos de ADN de 10 Kb cada unoLas eficiencias de clonación comunes para fragmentos preexistentes, sin homología final, ensamblados en el vector GeneArt® pYES1L con Sapphire Technology™ utilizando oligonucleótidos de ADN de "unión" son:
• >90% para 1 fragmento de 10 Kb
• >75% para 2 fragmentos de ADN de 10 Kb cada uno. Diseñe su clonación in silico. Un paso clave en el ensamblaje genético de alto orden GeneArt® es el diseño correcto de fragmentos y oligonucleótidos con la homología y el espaciamiento adecuados para garantizar el ensamblaje exitoso de su clon. Para simplificar y acelerar el proceso de diseño, ofrecemos una herramienta de diseño en línea gratuita para ayudarle a diseñar su experimento in silico. La herramienta verifica la compatibilidad del diseño experimental con las especificaciones del producto, diseña oligonucleótidos de ADN para la amplificación por PCR o para la unión de los diferentes elementos a clonar, y presenta al usuario una representación gráfica del vector, así como una secuencia anotada descargable en formato GenBank, compatible con el software Vector NTI®. Aplicaciones: El sistema de ensamblaje genético de alto orden GeneArt® está diseñado para potenciar los experimentos de clonación y ensamblaje de ADN en una amplia gama de aplicaciones de biología molecular y biología sintética, entre otras. El producto permite la creación de vectores de expresión modulares, con piezas intercambiables, y puede utilizarse para realizar diversas tareas que, de otro modo, implicarían múltiples pasos. Utilice el kit para construir proteínas de fusión, eliminar, reemplazar o añadir elementos de ADN como sitios de restricción, clonar fragmentos grandes de ADN preexistentes sin homología terminal y muchas otras técnicas que requieren la manipulación de secuencias genéticas. Cepa bacteriana o de levadura: MaV203, TOP10.
Método de clonación: Clonación sin fisuras
Descripción: Sistema de ensamblaje genético de alto orden GeneArt, con medio de crecimiento de levadura
Para usar con (aplicación): Clonación
Número de fragmentos: hasta 10 fragmentos
Línea de productos: GeneArt™
Tipo de producto: Kit de sistema de ensamblaje genético
Cantidad: 10 Reacciones
Tipo de muestra: ADN
Tamaño: 110 kb en total (vector más todas las inserciones)
Paso del flujo de trabajo: Ensamblaje del ADN
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una