Thermo Fisher, A13288, Kit de clonación y ensamblaje GeneArt™ sin fisuras

Kit de clonación y ensamblaje GeneArt™ Seamless. El kit permite la clonación simultánea y direccional de 1 a 4 fragmentos de PCR, de cualquier secuencia, en cualquier vector linealizado, en una sola reacción de 30 minutos a temperatura ambiente. El kit contiene todo lo necesario para el ensamblaje de fragmentos de ADN y su transformación en E. coli para la selección y el crecimiento de vectores recombinantes.
•Velocidad y facilidad: clone hasta 4 fragmentos de ADN, con la secuencia que elija, simultáneamente en un solo vector (hasta 13 Kb); no se requieren sitios de restricción de digestión, ligadura o recombinación.
• Precisión y eficiencia: diseñado para permitirle clonar lo que quiera, donde quiera, en la orientación que quiera y lograr hasta un 90 % de clones correctos sin dejar secuencias adicionales.
•Flexibilidad vectorial: utilice nuestro vector lineal o un vector de su elección
• Herramientas gratuitas: diseñe oligos de ADN y más con nuestra interfaz web gratuita que lo guía paso a paso a través de su proyecto.
• Diversas aplicaciones: Optimice diversas técnicas de biología sintética y molecular mediante la rápida combinación, adición, deleción o intercambio de segmentos de ADN. Para clonar más de 4 fragmentos de ADN, moléculas finales mayores de 110 kb o utilizar elementos de ADN preexistentes demasiado largos para ser amplificados por PCR, considere el sistema de ensamblaje genético de alto orden GeneArt™ (cat. n.° A13285). Creación de clones sencilla y rápida. GeneArt™ Seamless Cloning es un proceso simple de dos pasos que consiste en una reacción de ensamblaje en tubo, seguida de la transformación en E. coli TOP10 químicamente competente One Shot™. El kit utiliza las propiedades de una mezcla enzimática patentada para ensamblar fragmentos de ADN con homología terminal compartida sin dejar secuencias ni cicatrices adicionales (seamless). Una parte de la reacción de ensamblaje se transforma posteriormente en las células TOP10 competentes proporcionadas, obteniendo clones listos para su análisis al día siguiente. La homología terminal de 15 pares de bases requerida se puede diseñar fácilmente mediante amplificación por PCR con oligonucleótidos de ADN personalizados. Eficiencia, flexibilidad y precisión de clonación. Con el kit de clonación y ensamblaje GeneArt™ Seamless, los principales factores que influyen en la eficiencia de la clonación son el tamaño de los elementos de ADN (de 100 pb a 5 kb), el tamaño total de la molécula final (≤ 13 kb) y la calidad y especificidad del fragmento. El extremo terminal de los fragmentos de PCR (extremos A o romos) no afecta la eficiencia de la clonación. Las eficiencias de clonación típicas para diferentes números de fragmentos clonados en pUC19L son las siguientes:
• 90% para un solo elemento de ADN de 5 Kb
• 70% para 4 fragmentos de 1 Kb cada uno
• 40% para 4 fragmentos de ADN de 2 Kb cada uno. El éxito de la clonación es independiente de la secuencia del inserto y del tipo de vector, lo que permite diseñar y añadir prácticamente cualquier secuencia o combinación de secuencias deseada a cualquier plásmido, siempre que pueda linealizarse mediante digestión con enzimas de restricción o PCR. Los clones circularizados obtenidos de la reacción contienen únicamente la secuencia del vector original, los insertos y las homologías designadas, sin inserciones de nucleótidos extraños. Soporte para el diseño de clonación in silico. Un paso clave en GeneArt™ Seamless Cloning es el diseño correcto de fragmentos y oligonucleótidos con la homología y el espaciado adecuados para garantizar el ensamblaje exitoso de su clon. Para simplificar y acelerar el proceso de diseño, ofrecemos una herramienta en línea gratuita para ayudarle a diseñar su experimento in silico. La herramienta verifica la compatibilidad del diseño experimental con las especificaciones del producto, diseña oligonucleótidos de ADN con homología terminal para la amplificación por PCR de los diferentes elementos a clonar y presenta al usuario una representación gráfica del vector, así como una secuencia anotada descargable en formato GenBank, compatible con el software Vector NTI™. Aplicaciones: El kit GeneArt™ Seamless Cloning and Assembly está diseñado para optimizar los experimentos de clonación y ensamblaje de ADN en una amplia gama de aplicaciones de biología molecular y biología sintética, entre otras. El producto permite la creación de vectores de expresión modulares, con componentes intercambiables, y puede utilizarse para realizar diversas tareas que, de otro modo, implicarían múltiples pasos. Utilice el kit para construir proteínas de fusión, eliminar, reemplazar o añadir elementos de ADN como sitios de restricción en un vector existente, y muchas otras técnicas que requieren la manipulación de secuencias genéticas. Cepa bacteriana o de levadura: TOP10.
Tipo de célula: E. coli químicamente competente
Método de clonación: Clonación sin fisuras
Para usar con (aplicación): Clonación
Número de fragmentos: hasta 4 fragmentos
Línea de productos: GeneArt™
Tipo de producto: Kit de clonación y montaje
Cantidad: 20 Reacciones
Tamaño: 13 kb en total (vector más todas las inserciones)
Vector: pUC19L Linealizado
Paso del flujo de trabajo: Ensamblaje del ADN
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una