Thermo Fisher, A15918, Kit de ensamblaje GeneArt™ Tipo IIs, Bbs I

Kit de Ensamblaje GeneArt™ Tipo IIs, Bbs I. El Kit de Ensamblaje GeneArt® Tipo IIs, BbsI, permite la clonación y el ensamblaje sin interrupciones de hasta 8 fragmentos de ADN mediante escisión y ligadura simultáneas en una sola reacción. El kit utiliza una tecnología similar a la clonación Golden Gate con la enzima de restricción tipo IIs, BbsI, y permite ensamblar múltiples fragmentos en un orden predeterminado en cualquier vector compatible. Dado que el ensamblaje tipo IIs no se basa en la recombinación homóloga, el riesgo de reordenamientos es mínimo y se requiere una confirmación mínima de la secuencia del constructo final. El kit se ofrece en tres versiones, cada una con una enzima de restricción tipo IIs diferente (AarI, BsaI o BbsI). Todas las versiones incluyen una mezcla de enzimas todo en uno, un vector de clonación y controles de clonación. Nuestra Herramienta de Diseño de Cebadores y Constructos GeneArt® debe utilizarse para determinar el kit de ensamblaje GeneArt® adecuado para sus fragmentos; proporciona una interfaz fácil de usar para diseñar su constructo y crear y solicitar cebadores, en caso de ser necesario.
• Ensamblar múltiples fragmentos de ADN en cualquier orden, en cualquier vector compatible, sin cicatrices
• Evitar la recombinación homóloga y los reordenamientos asociados al clonar secuencias homólogas o repetitivas.
• Úselo para el ensamblaje de TAL, variantes genéticas y secuencias repetitivas.
• Cree sus propios vectores de clonación y expresión con elementos vectoriales personalizados
• Minimizar la confirmación de la secuencia del constructo final
• Elija entre tres enzimas tipo II. Clonación tipo II. La clonación GeneArt® tipo II es un proceso simple de dos pasos que consiste en una reacción de ensamblaje in vitro seguida de la transformación en E. coli competente. La endonucleasa de restricción tipo II, BbsI, reconoce una secuencia de ADN asimétrica y escinde la molécula de ADN a una distancia definida del sitio de reconocimiento de BbsI. Los extremos de su fragmento de ADN pueden diseñarse para que estén flanqueados por el sitio de restricción de BbsI, de modo que la digestión de los fragmentos elimine el sitio de reconocimiento y genere salientes complementarios que se pueden ligar sin problemas, creando una unión sin el sitio original. El kit incluye un vector de destino, llamado pType IIs, optimizado para este enfoque. Eficiencia, flexibilidad y precisión de clonación. Con el kit de ensamblaje GeneArt® tipo IIs, los principales factores que afectan la eficiencia de la clonación son el tamaño de los elementos de ADN, el tamaño total de la molécula final (≥ 10 kb) y la calidad y especificidad del fragmento. Las eficiencias de clonación típicas para diferentes cantidades de fragmentos clonados en pType II son:
• >95% para 5 fragmentos de 1 kb cada uno
• >60% para 8 fragmentos de 1 kb cada uno
• >85% para 2 fragmentos idénticos de 1 kb cada uno. Soporte de diseño de clonación in silico. Un paso clave en la clonación GeneArt® Tipo II es el diseño correcto de fragmentos y oligos con los sitios de reconocimiento y el espaciamiento adecuados para asegurar el ensamblaje exitoso de su clon. Para simplificar y acelerar el proceso de diseño, ofrecemos la herramienta de diseño de cebadores y constructos GeneArt® para ayudarle a diseñar su experimento in silico. Esta herramienta recomienda el kit GeneArt® correcto para su ensamblaje, verifica la compatibilidad del diseño experimental con las especificaciones del producto, diseña oligos de ADN, si es necesario, y presenta al usuario una representación gráfica del vector, así como una secuencia anotada descargable en formato GenBank compatible con el software VectorNTI®. Productos adicionales recomendados:
• Kit de clonación por PCR Zero Blunt® TOPO®, sin células competentes (n.º de cat. 450245)
• Kit de clonación por PCR Zero Blunt® TOPO®, con One Shot® TOP10 E. coli químicamente competente (n.° de cat. K280020)
• Células resistentes a fagos T1 One Shot® MAX Efficiency™ DH10B™ (n.° de cat. 12331-013) Método de clonación: Clonación sin interrupciones
Descripción: BbsI
Para usar con (aplicación): Clonación
Número de fragmentos: hasta 8 fragmentos
Línea de productos: GeneArt™
Tipo de producto: Kit de montaje
Cantidad: 10 Reacciones
Tamaño: 10 kb en total (vector más todas las inserciones)
Vector: pTipo IIs
Paso del flujo de trabajo: Ensamblaje del ADN
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una