Thermo Fisher, A20342, Alexa Fluor™ 633 C5 Maleimida

Alexa Fluor™ 633 C5 Maleimida. Alexa Fluor™ 633 es un colorante fluorescente rojo brillante con una excitación ideal para la línea láser de 633 nm. Utilizado para la generación de señales estables en imágenes y citometría de flujo, el colorante Alexa Fluor™ 633 es soluble en agua e insensible al pH de 4 a 10.
El derivado maleimida de Alexa Fluor™ 633 es la herramienta más popular para conjugar el colorante con un grupo tiol en una proteína, un oligonucleótido tiofosfato o un ligando de bajo peso molecular. Los conjugados resultantes de Alexa Fluor™ 633 presentan una fluorescencia más brillante y mayor fotoestabilidad que los conjugados de otros fluoróforos espectralmente similares.
Información detallada sobre esta maleimida AlexaFluor™:Etiqueta de fluoróforo:Colorante Alexa Fluor™ 633Grupo reactivo:maleimidaReactividad:grupos tiol en proteínas y ligandos, tiofosfatos de oligonucleótidosEx/Em del conjugado:622/640 nmCoeficiente de extinción:143 000 cm-1M-1Peso molecular:∼1300Reacción de conjugación típicaLa proteína debe disolverse a una concentración de 50-100 μM en un tampón adecuado (fosfato de 10-100 mM, Tris o HEPES) a pH 7.
0-7.
5. En este rango de pH, los grupos tiol de la proteína son suficientemente nucleófilos como para reaccionar casi exclusivamente con el reactivo en presencia de los grupos amina de la proteína, más numerosos, que están protonados y son relativamente poco reactivos. Recomendamos reducir cualquier enlace disulfuro en este punto utilizando un exceso molar de 10 veces de un agente reductor como DTT o TCEP. El exceso de DTT debe eliminarse mediante diálisis y la posterior modificación del tiol debe realizarse en condiciones sin oxígeno para evitar la reformación de los enlaces disulfuro; estas precauciones no son necesarias si se utiliza TCEP antes de la conjugación con maleimida.
La maleimida Alexa Fluor™ se disuelve típicamente en dimetilsulfóxido (DMSO) anhidro de alta calidad a una concentración de 1-10 mM inmediatamente antes de su uso. Las soluciones madre deben protegerse de la luz tanto como sea posible. Generalmente, esta solución madre se añade gota a gota a la solución de proteína, con agitación, para producir aproximadamente de 10 a 20 moles de reactivo por mol de proteína. La reacción se deja transcurrir a temperatura ambiente durante 2 horas o a 4 °C durante la noche, protegida de la luz. Cualquier reactivo tiol no reaccionado puede consumirse añadiendo un exceso de glutatión, mercaptoetanol u otro tiol soluble de bajo peso molecular.
Purificación del conjugado: Los anticuerpos marcados se separan típicamente del colorante Alexa Fluor™ libre mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalente. Para proteínas de mayor o menor tamaño, seleccione un medio de filtración en gel con un punto de corte de peso molecular adecuado o purifique mediante diálisis. Ofrecemos varios kits de purificación optimizados para diferentes cantidades de conjugado de anticuerpo: Kit de purificación de conjugado de anticuerpo para 0.
5-1 mg (A33086) Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 20-50 μg (A33087) Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 50-100 μg (A33088) Más información sobre el marcaje de proteínas y anticuerpos. Ofrecemos una amplia selección de kits de marcaje de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se adaptan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte nuestros kits de marcaje de anticuerpos o utilice nuestra herramienta de selección de productos químicos de marcaje para conocer otras opciones. Para obtener más información sobre nuestros kits de marcaje, lea la sección 1 sobre "Kits para el marcaje de proteínas y ácidos nucleicos".
2 en el Manual de Sondas Moleculares™.
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Reactividad química: Tiol
Emisión: 640 nm
Excitación: 622 nm
Etiqueta o tinte: Alexa Fluor™ 633
Tipo de producto: Tinte
Cantidad: 1 mg
Fracción reactiva: maleimida
Condición de envío: Temperatura ambiente
Tipo de etiqueta: Alexa Fluor
Línea de productos: Alexa Fluor™
Tamaño de la unidad: cada una