Thermo Fisher, A24231, Vector de expresión de proteínas de Chlamydomonas GeneArt™

Vector de Expresión de Proteínas de Chlamydomonas GeneArt™. El Vector de Expresión de Proteínas de Chlamydomonas GeneArt™ es nuestro vector de expresión de proteínas de Chlamydomonas de segunda generación para la expresión de transgenes del genoma nuclear del alga verde eucariota Chlamydomonas reinhardtii137c. Está optimizado para una expresión de alto nivel, permite la selección contra el silenciamiento génico y ofrece etiquetas proteicas duales para la detección y/o purificación del gen de interés. El kit incluye el vector de expresión y protocolos fáciles de seguir. Nuestro medio Gibco™ TAP, disponible por separado, está optimizado para el crecimiento y mantenimiento de Chlamydomonas.
Chlamydomonas reinhardtii137c está disponible en el Centro de recursos de Chlamydomonas.
• Expresar hasta el 1% de proteína soluble total de su gen de interés
• Seleccionar contra el silenciamiento de genes incluso en múltiples pasajes
• Detecte y purifique su gen de interés con etiquetas de epítopo 6His-TEV y/o V5-His
• Compatible con ensamblaje sin costuras para la creación de sus construcciones
• Le permite obtener resultados fiables con una viabilidad y pureza excepcionales de la cepa. El vector pChlamy_4 de Chlamydomonas ofrece varias ventajas sobre la expresión en cloroplastos, como modificaciones postraduccionales y la selección y/o secreción de proteínas. Sin embargo, la expresión del genoma nuclear ha sido generalmente poco robusta, y los mecanismos moleculares de la expresión deficiente no se comprenden por completo. Las posibles razones incluyen promotores deficientes, efectos de la posición de integración genómica y silenciamiento transgénico. El vector de expresión proteica GeneArt de Chlamydomonas proporciona niveles relativamente altos de proteína expresada y selección contra el silenciamiento. Nuestro vector pChlamy_4 también es compatible con la clonación continua, un método de clonación opcional que elimina secuencias adicionales en la construcción final.
Las características del vector incluyen:
• El promotor endógeno y constitutivo, Hsp70A-RbcS2, está compuesto por el activador Hsp70A y dos copias de la secuencia del intrón RBC S2, lo que resulta en una mayor expresión del gen de interés.
• El promotor híbrido Hsp70A-Rbc S2 fusionado al gen de resistencia a la bleomicina/Zeocin™ permite que los transformantes positivos mantengan los niveles de expresión de proteínas durante múltiples pasajes.
• La secuencia de autoescisión del péptido 2A del virus de la fiebre aftosa (FMDV) media la escisión adecuada entre los marcadores de resistencia y la proteína de interés para producir dos proteínas discretas.
• 3' UTR para la terminación adecuada de la transcripción y posibles beneficios adicionales como mayor eficiencia de traducción, estabilidad del ARNm y señales de poliadenilación
• Las etiquetas proteicas duales 6His-TEV y V5-His pueden fusionarse a ambos extremos del gen de interés, o a ninguno. Selección contra silenciamiento. Para evitar el silenciamiento transgénico que suele ocurrir en C. reinhardtii, nuestro nuevo vector pChlamy_4 está diseñado para que las proteínas se expresen como fusiones transcripcionales con el gen de resistencia a la bleomicina/zeocina sh-ble. La secuencia de autoescisión del péptido 2A del virus de la fiebre aftosa (FMDV) se coloca entre el gen de resistencia a los antibióticos y el gen de interés. Codifica una secuencia corta de ∼20 aminoácidos que media la escisión adecuada para producir dos proteínas discretas. Con este sistema, hemos visto que los transformantes positivos mantienen altos niveles de expresión durante mucho más tiempo que con otros sistemas, incluso después de muchos pases con o sin presión de selección.
Reactivo de transformación de máxima eficiencia para algasUno de los mayores obstáculos en la investigación y el desarrollo con Chlamydomonas ha sido la introducción de ADN exógeno en las cepas de Chlamydomonas debido a las paredes celulares rígidas.
Tipo de producto: Vector de expresión de proteínas
Condición de envío: Hielo seco
Cantidad: 10 reacciones
Línea de productos: GeneArt™
Tamaño de la unidad: cada una