Thermo Fisher, A29378, ARNm de nucleasa CRISPR GeneArt™

El ARNm de la nucleasa CRISPR GeneArt™ se formula mediante un nuevo proceso de fabricación para lograr una calidad superior y un rendimiento mejorado del producto. Este ARNm de Cas9 de tipo silvestre tiene dos señales de localización nuclear (NLS). Se ha demostrado que las construcciones de Cas9 con dos NLS son más eficientes para dirigir la proteína Cas9 al núcleo (1). El formato de ARNm está listo para la transfección y evita la necesidad de los largos pasos de clonación requeridos cuando se utilizan sistemas de vectores CRISPR. El ARNm de Cas9 se cotransfecta con un ARN guía específico de la diana (ARNg) para dirigir la proteína Cas9 al locus genómico deseado para crear una ruptura bicatenaria. El formato de ARN completo tiene una carga útil más pequeña que los sistemas de Cas9 basados ​​en plásmidos para una mejor administración en la célula y una mayor eficiencia de edición genómica. Además, el ARNm de Cas9 se puede utilizar en enfoques multiplex con más de un ARNg. Utilice este enfoque para determinar qué secuencia de gRNA funciona mejor para un objetivo particular o para editar múltiples loci genómicos con una sola transfección.
Cómo obtener una secuencia de ARNg. La edición genómica con tecnología CRISPR requiere un ARN guía no codificante (ARNg) para escindir el ADN genómico en una secuencia diana de interés. El ARNg tiene dos componentes moleculares: un ARN CRISPR específico de la diana (ARNcr) y un ARNcr transactivador (ARNtracr), que se han combinado en un único transcrito. La secuencia diana (20 bases) debe estar inmediatamente aguas arriba de un motivo PAM (NGG), que permite que la Cas9 inicie la unión. El PAM solo se encuentra en el ADN diana y no forma parte de la secuencia CRISPR específica de la diana. El ARNg y el motivo PAM guían a la nucleasa Cas9 hacia la secuencia genómica diana para formar un complejo y crear una rotura roma de ADN (DSB) bicatenaria tres nucleótidos aguas arriba del sitio PAM.
Utilice nuestra herramienta de búsqueda y diseño CRISPR de GeneArt para buscar en nuestra base de datos de más de 600.000 secuencias de ARNg específicas para cada gen del genoma humano y murino. Los ARNg prediseñados de GeneArt están optimizados para la inactivación génica y suelen dirigirse a los tres primeros exones transcritos por gen. Los resultados de la búsqueda incluyen recomendaciones basadas en la minimización de posibles efectos no deseados, posibles sitios de unión y mapas de exones con la ubicación de los ARNg. Esta herramienta también permite analizar cualquier secuencia de interés para diseñar secuencias CRISPR únicas.
Cómo hacer gRNAUna vez seleccionadas las secuencias de gRNA, elija entre tres opciones para hacer gRNA:1. El kit de síntesis de gRNA de precisión GeneArt para gRNA listo para transfección en tan solo cuatro horas, incluido el ensamblaje de la plantilla.
2. GeneArt CRISPR Strings, una plantilla de ADN sintética que consiste en el ARNg con un promotor T7 para transcripción in vitro o un promotor U6 para formato listo para transfectar, que se puede comprar a través de la herramienta de diseño y búsqueda de GeneArt CRISPR o completando el formulario de pedido de ADN de GeneArt CRISPR Strings y enviándolo a GeneArtSupport@lifetech.
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Ahorre tiempo y esfuerzo y deje que nuestro equipo de servicios personalizados de GeneArt diseñe, sintetice y purifique secuencias de ARNg transcritas in vitro (IVT) para usted. Para solicitar un presupuesto o realizar un pedido, comuníquese con nuestro departamento de Servicios Personalizados al 1-800-955-6288 x45682 o contáctenos.
servicios@lifetech.
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RecursosProtocolo demostrado: Ingeniería de células madre con CRISPR-Cas9Referencias1.
Cong L, Ran FA, Cox D, Lin S, Barretto R, Habib N, Hsu PD, Wu X, Jiang W, Marraffini LA, Zhang F. (2013) Ingeniería genómica multiplex utilizando sistemas CRISPR/Cas. Science 339(6121):819-23.
Tipo de producto final: ARN
Línea de productos: GeneArt™
Tipo de producto: ARNm de la nucleasa Crispr
Cantidad: 15 μg
Condición de envío: Hielo seco
Volumen (métrico): 15 μg
Formato: Tubo
Tamaño de la unidad: cada una