Thermo Fisher, A37563, éster de TFP Alexa Fluor™ 488

Los colorantes Alexa Fluor™ de 25 mg son moléculas reactivas que permiten añadir un marcador fluorescente a las aminas primarias (R-NH₂) de proteínas, oligonucleótidos modificados con aminas y otras moléculas que contienen aminas. Los conjugados Alexa Fluor™ resultantes presentan una fluorescencia más brillante y mayor fotoestabilidad que los conjugados de otros fluoróforos espectralmente similares. El éster Alexa Fluor™ 488 TFP produce un conjugado con una excitación/emisión de 495/515 nm, espectralmente similar a los conjugados de fluoresceína (FITC) y Cy₂.
Los colorantes Alexa Fluor™ están disponibles con emisiones de fluorescencia que abarcan el espectro visible y el infrarrojo cercano (consulte La serie de colorantes Alexa Fluor™ — Nota 1).
1en el Manual de Sondas Moleculares™) y proporcionan la combinación única de solubilidad en agua e insensibilidad al pH entre pH 4 y 10 para compatibilidad en diversos entornos biológicos.
Los ésteres de TFP (tetrafluorofenilo) representan una mejora con respecto a la química de los ésteres de succinimidilo (SE o éster NHS), que se suele utilizar para unir fluoróforos o haptenos a las aminas primarias de las biomoléculas. Ambas químicas reactivas producen el mismo enlace amida fuerte entre el colorante o hapteno y el compuesto de interés, pero los ésteres de TFP son menos susceptibles a la hidrólisis espontánea durante las reacciones de conjugación. Los ésteres de TFP Alexa Fluor™ son estables durante varias horas al pH básico que se utiliza habitualmente en las reacciones, una duración muy superior a la de los ésteres de succinimidilo.
Reacción de conjugación típica: Se pueden conjugar reactivos amino-reactivos con prácticamente cualquier proteína o péptido; el protocolo proporcionado está optimizado para anticuerpos IgG. Se puede escalar la reacción para cualquier cantidad de proteína, pero la concentración de proteína debe ser de al menos 2 mg/mL para obtener resultados óptimos. Recomendamos probar tres grados diferentes de marcaje, utilizando tres proporciones molares diferentes de reactivo/proteína.
El éster TFP Alexa Fluor™ normalmente se disuelve en dimetilsulfóxido (DMSO) anhidro de alta calidad (D12345) y la reacción se lleva a cabo a 0.
1–0.
Tampón de bicarbonato de sodio 2 M, pH 8.
3, a temperatura ambiente durante 1 hora. Dado que el pKa de la amina terminal es menor que el del grupo épsilon-amino de la lisina, se puede lograr un marcaje más selectivo del extremo amino utilizando un tampón con un pH más cercano a la neutralidad.
Purificación del conjugado: Los anticuerpos marcados se separan típicamente del colorante Alexa Fluor™ libre mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalente. Para proteínas de mayor o menor tamaño, seleccione un medio de filtración en gel con un valor de corte de peso molecular adecuado o purifique mediante diálisis.
Más información sobre el marcaje de proteínas y anticuerpos. Ofrecemos una amplia selección de kits de marcaje de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se adaptan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte "Marcaje de anticuerpos de la A a la Z" y utilice nuestra Herramienta de selección de química de marcaje para conocer otras opciones. Para obtener más información sobre nuestros kits de marcaje, lea "Kits para el marcaje de proteínas y ácidos nucleicos — Sección 1".
2 en el Manual de Sondas Moleculares™.
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Emisión: 515 nm
Excitación: 495 nm
Tipo de producto: Tinte
Cantidad: 25 mg
Condición de envío: Temperatura ambiente
Línea de productos: Alexa Fluor™
Tamaño de la unidad: cada una