Thermo Fisher, A39260, reactivo de transferencia de etiquetas de biotina Sulfo-SBED, formato No-Weigh™

Reactivo de transferencia de etiquetas de biotina Sulfo-SBED de Thermo Fisher, A39260, formato No-Weigh™ El reactivo de transferencia de etiquetas de biotina Sulfo-SBED de Thermo Scientific Pierce es un reactivo multifuncional para marcar una proteína purificada y luego transferir covalentemente la etiqueta de biotina adjunta a interactuadores específicos de esa proteína.
Sulfo-SBED es la abreviatura de sulfo-N-hidroxisuccinimidil-2-(6-[biotinamido]-2-(p-azidobenzamido)-hexanoamido) etil-1,3'-ditioproprionato. Es un reticulante químico heterobifuncional capaz de unirse covalentemente a aminas primarias en un extremo y a casi cualquier grupo funcional proteico en el otro. A diferencia de los reticulantes típicos, Sulfo-SBED también incluye un grupo biotina y un brazo espaciador disulfuro escindible. Juntas, estas características permiten la reticulación secuencial de proteínas interactuantes y la transferencia de la etiqueta de afinidad de biotina de una proteína (es decir, de una proteína a otra).
Por ejemplo, una proteína "cebo" purificada) a otra (posiblemente una proteína "presa" desconocida). La transferencia de etiquetas es un potente método in vitro para el descubrimiento de interacciones proteicas. Cada vez más publicaciones presentan el uso del reactivo de transferencia de etiquetas con biotina Sulfo-SBED para identificar parejas de unión de interacciones proteicas previamente desconocidas y para caracterizar con mayor precisión los dominios de unión específicos de otras interacciones proteicas.
Protocolo típico para el experimento de transferencia de etiquetas:
• Agregue unos microlitros de reactivo Sulfo-SBED disuelto a 0.
5-1 mL de proteína de cebo purificada en PBS.
• Incubar la mezcla durante 30 a 120 minutos en hielo o a temperatura ambiente en la oscuridad.
• Desalinizar o dializar (con luz tenue) para eliminar el exceso de Sulfo-SBED que no reaccionó de la proteína de cebo marcada.
• Agregue proteína de cebo marcada al lisado celular u otra solución que contenga supuestos interactuantes de proteínas objetivo ('presas').
• Cuando se hayan formado los complejos de interacción, exponga la solución a la luz ultravioleta (365 nm) durante varios minutos.
• Analizar los productos mediante uno de varios métodos:
•Western Blot: escindir enlaces cruzados en DTT, separar proteínas mediante SDS-PAGE y detectar bandas biotiniladas mediante Western Blot con estreptavidina-HRP.
•Purificación y espectrometría de masas o secuenciación: purifique por afinidad proteínas biotiniladas o fragmentos de péptidos después de la digestión con tripsina y realice espectrometría de masas o secuenciación para caracterizar las proteínas involucradas.
Reactividad química: amina a amina
Método de etiquetado: etiquetado químico, transferencia de etiquetas
Etiqueta o colorante: Biotina
Tipo de producto: Reactivo de transferencia de etiquetas de biotina Sulfo-SBED
Cantidad: 10 x 1 mg
Fracción reactiva: éster NHS, alquino
Condición de envío: Calificado para ambiente o hielo húmedo
Solubilidad: DMF (dimetilformamida), DMSO (dimetilsulfóxido), metanol, agua
Tipo de etiqueta: Biotina y otros haptenos
Línea de productos: Pierce™
Tamaño de la unidad: cada una