Thermo Fisher, A39263, EZ-Link™ Amina-PEG4-Destiobiotina, Formato No-Weigh™

EZ-Link™ Amina-PEG4-Destiobiotina, formato No-Weigh™ La EZ-Link Amina-PEG4-Destiobiotina de Thermo Scientific es un compuesto de amina pegilada cuyo grupo similar a la biotina se puede eluir de la estreptavidina, lo que la hace ideal para la conjugación de carbodiimida (EDC) con carboxilatos para etiquetado y purificación.
Características de EZ-Link Amina-PEG4-Destiobiotina, formato sin pesaje:
•Destiobiotina: el análogo de la biotina permite una fácil elución de la estreptavidina, una característica ideal para aplicaciones de purificación por afinidad.
•Activado por amina: la amina primaria se puede reticular con proteínas y superficies de materiales utilizando EDC y otros reticulantes.
•Pegilado: los grupos de polietilenglicol (PEG) en el brazo espaciador mejoran la solubilidad en agua de las moléculas biotiniladas. Este compuesto de destiobiotina es un análogo de la biotina modificado con amina que contiene un brazo espaciador de polietilenglicol (PEG) de 4 unidades. La destiobiotinilación se logra mediante la conjugación de la amina primaria con grupos carboxilo en materiales de superficie, péptidos o proteínas utilizando el reticulante de carbodiimida EDC (n.° de pieza 22980). EDC activa los grupos carboxilo para que se unan al grupo –NH₂ de la aminobiotina, formando un enlace amida. La etiqueta de destiobiotina se une a la estreptavidina y otras proteínas que se unen a la biotina con alta especificidad, pero se eluye fácilmente en condiciones suaves (p. ej.,
Por ejemplo, mediante desplazamiento competitivo con biotina libre regular. Por lo tanto, este reactivo es una alternativa útil a la Amina-PEG3-Biotina (N.º de pieza 21347) para las técnicas de avidina-biotina en las que se desea una elución no desnaturalizante de las proteínas marcadas. El formato sin pesaje (5 viales resellables de 1 mg) elimina las dificultades asociadas con el pesaje de pequeñas cantidades de reactivo y maximiza la protección del reactivo no utilizado contra la degradación.
Destiobiotina vs. Biotina. La destiobiotina es un análogo de la biotina de un solo anillo, libre de azufre, que se une a la estreptavidina con una especificidad casi igual, pero con menor afinidad que la biotina (1/Kd = 10^11 vs. 10^15 M, respectivamente)[1-2]. En consecuencia, las proteínas cebo destiobiotiniladas y sus compañeros interactuantes pueden eluirse de forma fácil y específica de la resina de afinidad de estreptavidina utilizando condiciones suaves basadas en el desplazamiento competitivo con biotina libre. Para experimentos de ensayos de pull-down con muestras biológicas, esta característica de liberación suave de la destiobiotina también ayuda a minimizar la copurificación de moléculas biotiniladas endógenas, que permanecen unidas a la estreptavidina tras la elución de los complejos proteicos diana con biotina libre. El sistema de afinidad avidina-biotina modificado también elimina la necesidad de utilizar condiciones de elución agresivas que podrían disociar los complejos o dañar la proteína o célula diana. Las técnicas basadas en destiobiotina son ideales cuando se utilizan proteínas nativas o recombinantes que no se expresan con una etiqueta de fusión y cuando se aíslan proteínas capturadas en condiciones nativas, como cuando se apunta a células intactas o proteínas de la superficie celular.
Marcaje con compuestos amínicos. Los compuestos amínicos pueden conjugarse con grupos funcionales de proteínas y otras moléculas de diversas maneras. El método más común consiste en reticular la amina primaria terminal con grupos carboxilo mediante el uso de ésteres de NHS. Los grupos carboxilo (-COOH) se encuentran en los residuos de aspartato o glutamato y en el extremo carboxilo de los polipéptidos. Al activarse con EDC (n.° de pieza 22980), los carboxilatos reaccionan con grupos amino (–NH₂) para formar enlaces amida. Las moléculas de carboxilato y los materiales de superficie pueden preactivarse mediante EDC con sulfo-NHS (n.° de pieza 24510) para su posterior reacción con aminas primarias (véase Química de ésteres de NHS).
Permeabilidad celular: Impermeabilidad celular
Método de etiquetado: etiquetado químico
Línea de productos: EZ-Link™
Tipo de producto: Amina-PEG4-Destiobiotina
Cantidad: 5 x 1 mg
Fracción reactiva: amina, amina primaria
Condición de envío: Hielo húmedo
Reactividad química: aldehído, ácido carboxílico, cetona
Etiqueta o colorante: Destiobiotina
Solubilidad: Agua
Espaciador: Pegilado, 28.
8 Å
Tamaño de la unidad: cada una