Kit de conversión de células a ADNc™ II, AM1722 de Thermo Fisher

40 reacciones. El kit Ambion™ Cells-to-cDNA™ II (patente en trámite) produce ADNc a partir de células de mamífero cultivadas en menos de 2 horas. No requiere aislamiento de ARN. Este kit contiene reactivos suficientes para 100 reacciones y es ideal para quienes desean realizar reacciones de transcripción inversa en pequeñas cantidades de células, numerosas muestras celulares o para científicos que no están familiarizados con el aislamiento de ARN.
• No requiere purificación de ARN
• De células en cultivo a ADNc en menos de 2 horas
• Detecta mensajes raros en tan solo 1 celda
Ideal para laboratorios sin equipo para el aislamiento de ARN. Ideal para aplicaciones de RT-PCR. El kit Cells-to-cDNA™ II (patente en trámite) integra la inactivación de ARNasas y el tratamiento con ADNasa I en un tampón de lisis celular compatible con RT-PCR, eliminando por completo el aislamiento de ARN. La mayoría de los tampones de lisis celular contienen desnaturalizantes potentes que, si se utilizan en reacciones enzimáticas, inhibirían o inactivarían la mayoría de las enzimas. Si se utiliza un tampón de lisis sin desnaturalizantes potentes, la ARNasa endógena puede degradar rápidamente el ARN celular. El kit Cells-to-cDNA™ II contiene un novedoso tampón de lisis celular que inactiva las ARNasas endógenas sin comprometer las reacciones enzimáticas posteriores. Tras la inactivación de las ARNasas, el lisado celular puede añadirse directamente a una reacción de síntesis de ADNc. Cells-to-cDNA™ II es compatible con protocolos de RT-PCR de uno y dos pasos.
Cuantitativo: Resultados lineales sin contaminación de ADN detectable. Para ilustrar la respuesta cuantitativa y lineal de Cells-to-cDNA™ II a las variaciones en el número de células de entrada, se realizó un experimento de RT-PCR cuantitativa en tiempo real con el sistema de detección de secuencias ABI 7700. Al representar gráficamente el umbral de ciclo (Ct) frente a la concentración celular de GAPDH, se obtuvo una curva estándar con una correlación de 0.
99. Por lo tanto, Cells-to-cDNA™ II produce resultados lineales para 1 a 10 000 células/μL en un ensayo de RT-PCR de dos pasos en tiempo real. Cabe destacar también que el control de PCR sin molde para el experimento de GAPDH fue negativo, lo que indica la eliminación completa del ADN genómico.
Procedimiento sencillo: El kit incluye todo lo necesario para pasar de células cultivadas a ADNc listo para PCR en menos de 2 horas; no se requiere aislamiento de ARN. Las células se lavan primero con PBS y luego se resuspenden en el tampón de lisis celular. Un breve calentamiento lisa las células e inactiva simultáneamente las ARNasas. A continuación, se realiza una digestión opcional con ADNasa para degradar el ADN genómico, seguida de un paso de inactivación térmica. Una fracción del lisado celular se utiliza posteriormente en una reacción de transcripción inversa con los reactivos incluidos.
Productos accesorios: Se recomienda la ADN polimerasa Taq termoestable SuperTaq™, disponible por separado (n.º de cat. AM2050 y AM2052). Para una amplificación óptima de fragmentos superiores a 1 kb, utilice la ADN polimerasa Taq termoestable SuperTaq™ Plus (n.º de cat. AM2054 y AM2056).
Tipo de producto final: ADNc
Número de reacciones: 40 reacciones
Temperatura óptima de reacción: 42 °C
Línea de productos: Ambion™, Cells-to-cDNA™
Tiempo de purificación: 2 hr.
Cantidad: 40 reacciones
Transcriptasa inversa: M-MLV
Tipo de muestra: células de mamíferos
Condición de envío: Hielo seco
Tamaño (producto final): 7 kb o menos
Para usar con (aplicación): PCR en tiempo real (qPCR), RT-PCR
Tamaño de la unidad: cada una