Kit de expresión génica de células a CT™ TaqMan™, Thermo Fisher, AM1729

El kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ (400 reacciones) permite realizar análisis de expresión directamente a partir de células cultivadas sin purificación de ARN. Este kit ahorra tiempo y ofrece un flujo de trabajo sencillo, adecuado para pocas muestras o que se puede integrar fácilmente en aplicaciones automatizadas de alto rendimiento.
El TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CTKit es:
• Completo: el flujo de trabajo optimizado incluye reactivos de lisis celular con eliminación de ADNg, mezcla de enzimas RT, tampón y la nueva mezcla maestra de expresión génica TaqMan™
•Rápido: preparación de la muestra en 7 minutos, incluido el tratamiento con DNasa, a temperatura ambiente
•Fácil: lisar las muestras en un tubo o directamente en placas de cultivo.
• Robusto: realiza análisis de expresión genética en 10 a 100 000 células por muestra; resultados equivalentes a los del ARN purificado.
Eficiente: contiene suficientes reactivos para generar 500 resultados de PCR en tiempo real a partir de 100 muestras iniciales. Con un método único para lisar células cultivadas, eliminando el ADN genómico y preservando la integridad del ARN, el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ contiene reactivos de transcripción inversa (RT) para la síntesis de ADNc y la mezcla maestra TaqMan™ Gene Expression Master Mix para el análisis de PCR en tiempo real. Los conjuntos de cebadores y sondas TaqMan™ se venden por separado.
Preparación sencilla de muestras en 7 minutos: parte de un flujo de trabajo completo. Tanto si utiliza placas como tubos, el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™, que utiliza el sencillo procedimiento de preparación de muestras de 7 minutos descrito (véase la figura), está diseñado para 10–100.000 células cultivadas por muestra. Las células se lavan en PBS y se lisan en solución durante 5 minutos a temperatura ambiente; el tratamiento con DNasa puede realizarse simultáneamente. La lisis finaliza a temperatura ambiente mediante una incubación de 2 minutos con solución de parada. Los lisados ​​están ahora listos para la transcripción inversa o el almacenamiento a –20 °C. Dado que las muestras pueden procesarse directamente en pocillos de cultivo (96 o 384 pocillos), se minimiza la manipulación de las muestras y la posibilidad de pérdida o error de transferencia, lo que facilita un procesamiento rápido y de alto rendimiento. A diferencia de los protocolos tradicionales de aislamiento de ARN de varios pasos, no se requieren pasos de calentamiento, lavado ni centrifugación. El kit simplifica enormemente un laborioso proceso de 30 a 60 minutos y lo reduce a 7 minutos.
El flujo de trabajo del kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ permite una evaluación de la expresión génica inigualable con cualquiera de los más de 700.000 ensayos de expresión génica TaqMan™. Este kit ha sido ampliamente probado para determinar su especificidad con una amplia selección de ensayos de expresión génica TaqMan™ y muestra un rendimiento equivalente al obtenido con ARN purificado (véase la figura).
Consiga un rendimiento y una sensibilidad inigualables. A diferencia de algunos kits de la competencia que limitan la cantidad de lisado en la reacción de RT al 5%, el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ puede procesar el 45% del volumen total de la reacción de RT como lisado celular. Además, el ADNc puede representar hasta el 45% del volumen de la reacción de PCR en tiempo real. El gran volumen de lisado en la reacción de RT optimizada, junto con el gran volumen de ADNc en la PCR en tiempo real posterior con la mezcla maestra TaqMan™ Gene Expression, garantiza la máxima sensibilidad. La mezcla maestra amplifica la diana con precisión y exactitud, lo que permite la detección de pequeñas cantidades de la diana, como transcripciones con niveles bajos de expresión.
La capacidad de detectar cantidades diana limitadas se evaluó mezclando un número constante de células humanas con diversas cantidades de células de ratón. Las mezclas celulares se prepararon con el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ y se analizaron para detectar un gen específico de ratón y otro de humano. Se generaron datos comparativos del mismo modo con ARN purificado mediante la metodología tradicional. Los datos muestran que el ARN de tan solo 10 células de ratón fue detectable en un fondo de ARN de 10 000 células humanas (véase la figura). La capacidad del kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ para detectar transcripciones de baja abundancia fue equivalente a la del ARN purificado; a niveles bajos, fue superior.
Además, se comparó el rendimiento del kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ con el de kits de lisados ​​de la competencia y con ARN purificado. Se examinaron muestras de 100 a 100 000 células por reacción de lisis. La sensibilidad del protocolo del kit TaqMan™ Cells-to-CT™ fue equivalente a la obtenida con ARN purificado y superó a la de los lisados ​​de la competencia (véase la figura). Asimismo, la ausencia de inhibición con altas cantidades de células y la baja variación entre réplicas técnicas demuestran la fiabilidad de este enfoque para estudios de expresión génica con células cultivadas.
Rendimiento comprobado, comprobado en conjunto. Todos los componentes del kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ se han optimizado para un rendimiento consistente y fiable. Esto elimina las dudas que conlleva el montaje de kits separados de preparación de muestras, RT y PCR en tiempo real. Además, el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ se ha validado con los ensayos de expresión génica TaqMan™ para una mayor garantía de calidad.
Producto accesorio: El kit de control TaqMan™ Cells-to-CT™ fue diseñado para usarse con el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™. Este kit contiene un control endógeno (ACTB) para normalizar la variabilidad de la carga de la muestra, un control artificial de XenoRNA™ y el correspondiente ensayo de expresión génica TaqMan™ para monitorizar los efectos de la inhibición de la PCR.
Para usar con (equipo): Sistema 7000, Sistema 7300, Sistema 7500, Sistema 7900HT, Sistema de PCR en tiempo real rápido StepOnePlus™ de Applied Biosystems, StepOne™, Modo estándar, StepOnePlus™, Modo estándar, Sistemas QuantStudio 6 y 7 Pro, Sistema QuantStudio 7 Flex, Sistemas QuantStudio 3 y 5, Sistema QuantStudio 12k Flex, Sistema QuantStudio 6 Flex
Formato: Tubo
Características ecológicas: se utilizan menos recursos y se generan menos residuos, son menos peligrosos
Número de reacciones: 400 reacciones
Colorante de referencia pasivo: ROX (premezclado)
Polimerasa: ADN polimerasa
Línea de productos: Ambion™, Cells-to-CT™, TaqMan™
Tipo de producto: Kit de expresión génica de células a C
Grado de pureza o calidad: UP (Ultra Puro)
Cantidad: 400 reacciones
Tipo de reactivo: Lisis celular
Transcriptasa inversa: M-MLV
Tipo de muestra: Célula
Condición de envío: Hielo seco
Suficiente para: 400 reacciones
Método de detección: cebador-sonda
Rendimiento de PCR rico en GC: alto
Método de PCR: RT-qPCR de 2 pasos
Velocidad de reacción: estándar
Tamaño de la unidad: cada una