Thermo Fisher, C10499, Click-iT™ EdU, ensayo de proliferación para microplacas

Thermo Fisher, C10499, Ensayo de Proliferación Click-iT™ EdU para Microplacas. El Ensayo de Proliferación Click-iT EdU para Microplacas proporciona un método más simplificado y robusto para la medición de la proliferación de células de mamíferos en comparación con los métodos tradicionales basados ​​en BrdU. Tras la incorporación de EdU (un análogo de timidina modificado) al ADN recién sintetizado, la peroxidasa de rábano picante (HRP) se une covalentemente mediante una reacción de clic altamente específica. A continuación, se añade el reactivo Amplex UltraRed, un sustrato de HRP, y se detecta la señal de fluorescencia resultante. Gracias a la unión altamente específica de HRP a EdU, este ensayo proporciona una medición altamente sensible y fiable de la proliferación de células de mamíferos en formato de microplaca.
Las características del ensayo de proliferación Click-iT EdU para microplacas incluyen:
•Rendimiento mejorado: la conjugación directa de HRP con EdU incorporado mejora la sensibilidad y la precisión del ensayo.
•Mayor confiabilidad: el formato del ensayo da como resultado una baja variabilidad entre pocillos.
• Protocolo simplificado: reduce el tiempo necesario para obtener los datos y facilita el seguimiento del protocolo.
•Multiplex habilitado: el ensayo se puede multiplexar fácilmente con otros reactivos de salud celular, lo que genera más datos por muestra. La medición de la proliferación celular es un método fundamental para evaluar la salud celular, determinar la genotoxicidad y evaluar fármacos anticancerígenos. El método más preciso para medir la proliferación es la detección directa de la síntesis de ADN. Originalmente, esto se lograba mediante la incorporación de un nucleósido radiactivo (p. ej.,
ej., 3H-timidina). Este método fue reemplazado por la detección mediante anticuerpos del análogo nucleósido bromo-desoxiuridina (BrdU). Tras la incorporación de BrdU al ADN recién sintetizado, se requiere la desnaturalización para exponer las moléculas de BrdU al anticuerpo anti-BrdU. La desnaturalización implica métodos agresivos (HCl, calor o enzimas), es lenta y difícil de realizar de forma consistente.
El ensayo de proliferación Click-iT EdU es una alternativa al ensayo BrdU. El análogo nucleósido EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina) se añade a células vivas y se incorpora al ADN durante la síntesis activa de ADN. El EdU incorporado contiene un grupo alquino unido covalentemente al grupo azida presente en la HRP mediante una reacción covalente catalizada por cobre de alta especificidad (reacción clic). A continuación, se añade el reactivo Amplex UltraRed y se registra su conversión por HRP en un producto altamente fluorescente mediante un lector de microplacas de fluorescencia (excitación: 568, emisión: 585 nm). Con un alto coeficiente de extinción, buena eficiencia cuántica y resistencia a la autooxidación, el reactivo Amplex UltraRed ofrece una mayor sensibilidad y un rango de ensayo más amplio que otros sustratos de HRP fluorogénicos o colorimétricos. También ofrece versatilidad mediante la detección por fluorescencia o absorbancia.
En comparación con los ensayos de proliferación en microplaca basados ​​en anti-BrdU, el ensayo de proliferación Click-iT EdU utiliza pequeñas fracciones de reacción y no requiere anticuerpos ni desnaturalización del ADN, factores que pueden reducir el rendimiento del ensayo. Además, no requiere la unión de estreptavidina y biotina, lo que elimina los pasos necesarios para bloquear la biotina en las células con altos niveles de biotina endógena.
Método de detección: fluorescencia
Formato: placa de 96 pocillos
Características ecológicas: menos peligroso
Cantidad: 400 ensayos
Condición de envío: Aprobado para envío a temperatura ambiente o en hielo húmedo.
Para uso con (aplicación): ensayo de proliferación
Para usar con (equipo): lector de microplacas
Línea de productos: CyQUANT
Tipo de producto: Ensayo de proliferación
Tamaño de la unidad: cada una