Thermo Fisher, C10645, Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 350 Kit de ensayo de citometría de flujo

Thermo Fisher, C10645, Kit de ensayo de citometría de flujo Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 350. El kit de ensayo de citometría de flujo Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 ofrece un ensayo simplificado y más robusto para analizar la replicación del ADN en células proliferantes, en comparación con los métodos tradicionales de BrdU. El ADN recién sintetizado se analiza mediante el láser UV del citómetro de flujo. La fórmula Click-iT Plus es compatible con fluoróforos estándar, incluyendo fluoróforos R-PE y tándems R-PE, así como con proteínas fluorescentes.
Multiplexable: compatible con R-PE (y tándems) y proteínas fluorescentes. Preciso: resultados superiores a los ensayos BrdU. Rápido: resultados en tan solo 60 minutos. Los ensayos Multiplexable Click-iT Plus Alexa Fluor 350 EdU pueden utilizarse junto con R-PE y tándems R-PE, así como con proteínas fluorescentes como GFP y mCherry. El reactivo de marcaje Alexa Fluor 350 se excita fácilmente a 350 nm con un láser UV y emite a 438 nm.
Un método avanzado que le da resultados superiores a BrdU El método más preciso de análisis de proliferación es la medición directa de la síntesis de ADN. Originalmente, esto se realizaba a través de la incorporación de nucleósidos radiactivos. Este método fue reemplazado por la detección basada en anticuerpos del análogo de nucleósido bromodesoxiuridina (BrdU). El ensayo de citometría de flujo Click-iT Plus EdU es una alternativa novedosa al ensayo BrdU. EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina) es un análogo de timidina que se incorpora al ADN durante la síntesis activa de ADN. La detección se basa en la química clic, que es una reacción covalente catalizada por cobre entre una azida y un alquino. En esta aplicación, el alquino se encuentra en la fracción etinilo de EdU, mientras que la azida está acoplada al colorante Alexa Fluor. Los métodos de citometría de flujo estándar se utilizan para determinar el porcentaje de células en fase S en la población.
Las condiciones suaves permiten su uso con colorantes y anticuerpos del ciclo celular. El pequeño tamaño de la azida del colorante permite una detección eficiente del EdU incorporado en condiciones suaves, mientras que la fijación estándar con aldehído y la permeabilización con detergente son suficientes para que el reactivo de detección Click-iT Plus acceda al ADN. Esto contrasta con los ensayos de BrdU, que requieren la desnaturalización del ADN (mediante HCl, calor o digestión con DNasa) para exponer el BrdU y poder detectarlo con un anticuerpo anti-BrdU. El procesamiento de muestras para el ensayo de BrdU puede alterar la señal de la distribución del ciclo celular, así como la destrucción de los sitios de reconocimiento de antígenos cuando se utiliza el método de HCl. Por el contrario, el ensayo Click-iT Plus EdU, de fácil uso, es compatible con colorantes del ciclo celular. El ensayo Click-iT Plus EdU también se puede multiplexar con anticuerpos contra marcadores de superficie e intracelulares, así como conjugados marcados con fluoróforos estándar, incluidos R-PE, tándems R-PE y proteínas fluorescentes (GFP y mCherry).
Protocolo rápido y sencillo. El protocolo Click-iT Plus EdU se basa en los pasos de fijación con aldehído y permeabilización con detergente para el marcaje inmunohistoquímico de anticuerpos. Sin embargo, EdU es compatible con otros agentes de fijación/permeabilización, como la saponina y el metanol. En solo cinco pasos, estará listo para analizar sus datos de proliferación celular: Trate las células con EdUFix y permeabilícelas. Detecte las células en fase S con el cóctel de detección Click-iT Plus durante 30 minutos.
Lavar una vezAnalizarLos resultados se pueden ver en tan solo 60 minutos en algunas circunstancias, pero recomendamos 90 minutos para todas las aplicaciones.
Formato: Kit
Cantidad: 50 ensayos
Condición de envío: Temperatura ambiente
Emisión: 350/438
Para usar con (equipo): citómetro de flujo
Línea de productos: Alexa Fluor, Click-iT
Tipo de producto: Reactivo
Tamaño de la unidad: cada una